過氧亞硝酸鹽對大鼠海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)元谷氨酸能突觸傳遞影響的研究.pdf

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模罕緦?shí)驗(yàn)通過研究對海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)元谷氨酸能興奮性突觸傳遞的作用，探討過氧亞硝酸鹽對學(xué)習(xí)和記憶的潛在影響，進(jìn)一步解析過氧亞硝酸鹽的神經(jīng)毒性機(jī)制。
　　 實(shí)驗(yàn)方法：使用過氧亞硝酸鹽供體SIN-1(3-morpholino-sydnonimine)，研究不同濃度的過氧亞硝酸鹽(100μM、1 mM)對大鼠海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)元谷氨酸能突觸傳遞的影響。具體說，主要采用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)的電壓鉗記錄模式，記錄在過氧亞硝酸鹽有效

2、處理前后，腦片上海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)元由不同離子型配體門控受體介導(dǎo)的興奮性突觸后電流的改變，包括N-methyl-D-asparticacid(NMDA)和α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxa-zolep-propionate(AMPA)受體。通過刺激器誘發(fā)突觸后電流，檢測過氧亞硝酸鹽調(diào)控突觸功能的神經(jīng)通路，并進(jìn)一步探討過氧亞硝酸鹽產(chǎn)生神經(jīng)毒理作用中的可能機(jī)制。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　 1

3、)100μM的SIN-1可以增加海馬腦片CA1區(qū)興奮性谷氨酸能突觸傳遞。AMPA受體介導(dǎo)的微小突觸后電流的電流幅值由-35.032±4.66 pA增加為-42.44±5.16 pA，事件間隔時(shí)間由4406.42±219.30 ms增加為5701.06±296.59 ms。同時(shí)，由NMDA受體介導(dǎo)產(chǎn)生的微小突觸后電流的電流幅值從平均-25.42±6.42 pA增加為-30.76±4.87 pA，事件間隔時(shí)間由2647.33±160.01

4、ms降低為2491.33±168.77 ms。
　　 2)1 mM的SIN-1抑制海馬腦片CA1區(qū)興奮性谷氨酸能突觸傳遞。AMPA受體介導(dǎo)的微小突觸后電流的幅值由-32.81±4.37 pA減少為-29.09±2.42 pA。事件間隔時(shí)間由4096.54±481.74 ms減少為1632.23±432.85ms。NMDA受體介導(dǎo)的微小突觸后電流的幅值則由-28.14±2.47 pA減小為-18.94±3.76 pA。事件間隔時(shí)間

5、由1651.89±332.19 ms增加為2727.40±326.25 ms。
　　 3)SIN-1可能通過經(jīng)Perforant通路到CA1區(qū)神經(jīng)元的直接投射發(fā)揮突觸傳遞的調(diào)控作用。將刺激電極置于Perforant通路時(shí)，100μM SIN-1較對照組會(huì)增加CA1區(qū)神經(jīng)元的誘發(fā)突觸后電流，eEPSC幅值由-107.5±10.4 pA增加為-128.5±6.2 pA，增幅約為20％。而將刺激電極置于CA3區(qū)Schaffer側(cè)枝時(shí)，

6、在100μM SIN-1處理前后，CA1區(qū)神經(jīng)元的誘發(fā)突觸后電流沒有影響。
　　 4)SIN-1引起海馬腦片上大量蛋白的酪氨酸硝基化修飾，蛋白的硝基化程度與SIN-1的濃度成正相關(guān)。
　　 主要結(jié)論：過氧亞硝酸鹽可能通過經(jīng)Perforant通路到CA1區(qū)神經(jīng)元的直接投射，實(shí)現(xiàn)對海馬CA1區(qū)神經(jīng)元谷氨酸能突觸傳遞的雙向調(diào)控。在較低濃度時(shí)，過氧亞硝酸鹽分別上調(diào)AMPA與NMDA受體介導(dǎo)的微小興奮性突觸后電流的幅值與發(fā)放頻率，