介導(dǎo)大鼠海馬CA1區(qū)癲癇樣活動(dòng)的離子型谷氨酸受體的變化.pdf

1、目的：
　　本研究采用正常大鼠海馬腦片灌流離子型γ-氨基丁酸受體(GABAA受體)拮抗劑荷包牡丹堿(bicuculline,Bic)引起癲癇樣活動(dòng);并應(yīng)用腦立體定位技術(shù)在大鼠海馬CA3中心區(qū)通過(guò)微量注射海人草酸(Kainicacid,KA)來(lái)建立顳葉癲癇(temporal lobe epilepsy,TLE)大鼠模型。以離體腦片細(xì)胞外場(chǎng)電位記錄方法觀測(cè)離子型谷氨酸受體在大鼠海馬CA1區(qū)癲癇樣活動(dòng)中的變化,為進(jìn)一步探討癲癇的發(fā)生機(jī)制

2、提供依據(jù)。
　　方法：
　　1模型建立
　　1.1顳葉癲癇模型雄性Wistar大鼠,體重200~240克,清潔級(jí)。大鼠經(jīng)水合氯醛(350mg/kg)腹腔麻醉后,固定于立體定位儀上,在右側(cè)海馬CA3中心區(qū)(AP:-4.0mm,ML:4.4mm,DV:3.8mm)用微量注射針注入2.5~3μlKA(0.4μg/μl),注射15min,留針10min,術(shù)后縫合頭皮。大鼠急性發(fā)作等級(jí)參照Racine標(biāo)準(zhǔn)分級(jí),達(dá)到Ⅳ級(jí)及以上視為

3、建模成功。正常對(duì)照組在海馬CA3區(qū)注射等量生理鹽水。
　　1.2急性癲癇樣活動(dòng)正常大鼠離體海馬腦片灌流GABAA受體拮抗劑Bic(30μmol/L)以引起癲癇樣活動(dòng)。
　　2離體腦片制備大鼠用2％戊巴比妥鈉麻醉后迅速斷頭取腦,置于持續(xù)給予95%O2和5%CO2混合氣的4℃人工腦脊液(artificialcerebrospinalfluid,ACSF)中。待腦組織冷卻后沿海馬槽纖維走向切成400μm厚的腦片,并將其移至含(30

4、±2)℃ACSF的孵育槽中,持續(xù)通入混合氣,孵育1~2h。
　　3場(chǎng)電位記錄將孵育的腦片移至記錄槽,持續(xù)灌流95%O2和5%CO2混合氣飽和的ACSF,灌流速度2ml/min,溫度32℃。刺激海馬輻射層Schaffer側(cè)支通路,在CA1區(qū)錐體細(xì)胞層記錄群峰電位(populationspike,PS)。
　　4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果以?x±s表示,組間均數(shù)用t檢驗(yàn)進(jìn)行比較,P<0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

5、義。
　　結(jié)果：
　　1海馬CA1區(qū)癲癇樣活動(dòng)PS的變化正常大鼠海馬腦片CA1區(qū)錐體細(xì)胞層通常記錄到單個(gè)PS;正常腦片灌流Bic(30μmol/L)后可引起多個(gè)PS的癇樣放電,PS數(shù)為(5.07±0.30,n=11),第1個(gè)PS的幅度明顯增大,為灌流前的(150.86±22.56)%(n=11,P﹤0.01);TLE模型大鼠腦片記錄到癇樣放電,PS數(shù)為(6.12±0.33,n=9),與正常腦片相比,引起癲癇樣活動(dòng)的腦片記錄到

6、的PS數(shù)顯著增加(P﹤0.01)。
　　2介導(dǎo)海馬CA1區(qū)PS的離子型谷氨酸受體的變化正常腦片CA1區(qū)錐體細(xì)胞記錄到的PS主要由非N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受體介導(dǎo)。正常腦片灌流Bic后記錄到的PS除了由非NMDA受體介導(dǎo)外,NMDA受體也參與癇樣電位的介導(dǎo)。灌流NMDA受體拮抗劑DL-2-氨基-5-磷酸戊酸(DL-2-amino-5-phosphonovalericacid,AP

7、V,50μmol/L),第1個(gè)PS幅度無(wú)明顯變化(n=11,P﹥0.05),而第4和第5個(gè)PS幅度明顯降低(n=11,P﹤0.05;n=9,P﹤0.05)。TLE模型大鼠海馬腦片灌流APV后,第1個(gè)PS幅度也無(wú)明顯變化(n=9,P﹥0.05),第4和第5個(gè)PS幅度明顯降低(n=8,P﹤0.05;n=8,P﹤0.01),并可進(jìn)一步抑制灌流非NMDA受體拮抗劑6-氰基-7-硝基喹噁啉-2,3-土衛(wèi)四(6-cyano-7-nitroquino