髓系衍生抑制性細(xì)胞在潰瘍性結(jié)腸炎癌變中的作用.pdf

1、背景:潰瘍性結(jié)腸炎是一種原因未明的結(jié)腸和直腸的炎性病變，其癌變風(fēng)險(xiǎn)可隨著病程的延長(zhǎng)而增加。目前由于潰瘍性結(jié)腸炎癌變的臨床病例的累積需要較長(zhǎng)的時(shí)間，難度較大，因此，建立一種切實(shí)可行的可以模仿人類潰瘍性結(jié)腸炎癌變過(guò)程的動(dòng)物模型則顯得非常重要。近年來(lái)，關(guān)于潰瘍性結(jié)腸炎癌變的動(dòng)物模型較多。研究者發(fā)現(xiàn)，給予小鼠葡聚糖硫酸鈉和普通飲用水?dāng)?shù)個(gè)循環(huán)，可觀察到“炎癥-不典型增生-癌變”的發(fā)生，但所需實(shí)驗(yàn)周期較長(zhǎng)且癌變率低。文獻(xiàn)報(bào)道，予以小劑量氧化偶氮甲烷

2、(AOM)及1個(gè)周期2％葡聚糖硫酸鈉（DSS，分子量36，000-50，000）致炎刺激，可于短期內(nèi)（20周）建立潰瘍性結(jié)腸炎癌變的動(dòng)物模型[3]。髓系衍生抑制性細(xì)胞(Myeloid-derived suppressorcells，MDSCs)是具有多項(xiàng)分化潛能和免疫抑制功能的一類未成熟的髓系細(xì)胞群體，主要由巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞的祖細(xì)胞以及幼稚的髓系細(xì)胞組成。在小鼠體內(nèi)，MDSCs多表達(dá)Gr1和CD11 b。近年來(lái)，許多研究

3、表明髓系衍生抑制性細(xì)胞可在腫瘤、炎癥等病理狀態(tài)下產(chǎn)生積累，并進(jìn)而在血液、二級(jí)淋巴器官以及病變組織局部增多，誘導(dǎo)免疫耐受形成，從而產(chǎn)生強(qiáng)烈的免疫抑制作用。但MDSCs在潰瘍性結(jié)腸炎相關(guān)性結(jié)腸癌的作用卻少有報(bào)道。本研究中，我們探索性通過(guò)小劑量AOM(10mg/kgWt)腹腔注射聯(lián)合飲用3個(gè)周期的3％DSS溶液建立潰瘍性結(jié)腸炎癌變的小鼠模型，通過(guò)檢測(cè)小鼠病變組織局部、骨髓及脾臟MDSCs的變化，從而探討MDSCs在潰瘍性結(jié)腸炎及其相關(guān)性結(jié)腸癌

4、發(fā)生發(fā)展中的作用，為由MDSCs介導(dǎo)的免疫逃逸提供新的證據(jù)，進(jìn)而為抗腫瘤的免疫治療提供潛在的治療靶點(diǎn)。
　　 研究目的:建立潰瘍性結(jié)腸炎癌變的小鼠模型，通過(guò)該模型探討MDSCs在潰瘍性結(jié)腸炎相關(guān)性結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用，以期為抗腫瘤的免疫治療開辟新的途徑。
　　 材料與方法:選擇6周齡C57BL/6雄性小鼠40只，隨機(jī)分為四組（每組各10只）:A組為造模組AOM+DSS組，B組為單純DSS組，C組為單純AOM組，D組為空

5、白對(duì)照組。所有動(dòng)物均于動(dòng)物房適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，A組小鼠給予腹腔注射AOM(10mg/kgWt)1次，一周后予3％DSS溶液喂養(yǎng)7天，休息14天為一個(gè)循環(huán)，重復(fù)3個(gè)循環(huán)。B組和C組分別只給予3％DSS喂養(yǎng)或AOM腹腔注射，D組不予任何處理。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中記錄小鼠飲食情況、體重、大便、毛發(fā)顏色及精神狀態(tài)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，乙醚麻醉，頸椎脫臼處死小鼠，打開腹腔，留取肛門至回盲部整段大腸，在顯微鏡下觀察其病理變化，并通過(guò)免疫熒光組化方法，分析MDSCs在

6、病變小鼠大腸組織局部的聚集情況。同時(shí)分離股骨、脛骨和脾臟，分別取得骨髓細(xì)胞懸液和脾臟細(xì)胞懸液，經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)病變小鼠骨髓和脾臟中MDSCs的比例。
　　 結(jié)果:
　　 1.建模結(jié)果:A組小鼠首次3％DSS溶液喂養(yǎng)后第5天即出現(xiàn)肉眼血便，正常飲水4天后基本恢復(fù)。第3周期結(jié)束，A組中所有小鼠大腸均可見腫塊產(chǎn)生，癌變率為50％(5/10)，主要位于近肛門側(cè)，其次為結(jié)腸中段，近口側(cè)未見腫瘤形成;B組小鼠于3％DSS溶液喂養(yǎng)期間

7、可見血便形成，恢復(fù)正常飲水后血便消失，病理組織觀察大腸組織炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)明顯，C、D組未見異常。
　　 2.免疫熒光組化結(jié)果:A、B組大腸粘膜局部MDSCs表達(dá)較C、D組明顯增多(P＜0.05);且A組較B組明顯升高(P＜0.05)。3.流式細(xì)胞分析結(jié)果:A、B組小鼠骨髓和脾臟中MDSCs比例較C、D組比例明顯升高(P＜0.05)，且A組較B組明顯升高(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.小劑量致癌劑AOM腹