壇紫菜自由絲狀工廠化種苗培育技術(shù)研究.pdf

1、壇紫菜(Porphyra haitanensis)是中國(guó)東南沿海浙江、福建和廣東特有的重要栽培經(jīng)濟(jì)紅藻。它在我國(guó)海藻栽培方面占有比較重要的位置，產(chǎn)量占我國(guó)紫菜（壇紫菜和條斑紫菜）的70％以上。目前，壇紫菜栽培的種苗主要通過貝殼絲狀體來實(shí)現(xiàn)。然而，貝殼絲狀體種苗培育存在許多不足，如占用大量土地和廠房、受自然條件影響大、種苗供應(yīng)不穩(wěn)定等。因此，近年來，學(xué)者不斷探索紫菜種苗培育的新方式。其中，自由絲狀體種苗因具有十分重要的應(yīng)用前景而受到青睞。

2、基于此，本論文圍繞壇紫菜自由絲狀體培養(yǎng)開展了一系列的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)，通過技術(shù)優(yōu)化和重組，探索其工廠化種苗培育的可行性，為擴(kuò)大生產(chǎn)和推廣應(yīng)用提供依據(jù)和參考。研究結(jié)果如下：
　　1.壇紫菜自由絲狀體培養(yǎng)過程中的水處理及雜藻防治。
　　1）除雜-硅藻處理方面：本研究結(jié)合不同的除雜和水處理方式對(duì)壇紫菜自由絲狀體進(jìn)行了培養(yǎng)，其中除雜方式包括①淡水漂洗；②打碎濾；③添加不同濃度的GeO2（3，6，9μg/ml）。海水處理方式包括①暗沉淀；②滅

3、菌；③煮沸；④添加漂白液（0.25，0.5，0.75ml漂白液/L培養(yǎng)海水）。結(jié)果表明，暗沉淀及加漂白液0.25ml/L海水培養(yǎng)除雜效果較好，加GeO26μg/ml的培養(yǎng)海水除雜較快；加漂白液0.25ml/L培養(yǎng)海水及加GeO23μg/ml的藻體生長(zhǎng)情況較好。
　　2）除雜-藍(lán)藻處理方面：除雜方式包括①青霉素鈉；②青霉素鈉+硫酸鏈霉素；③CuSO4；④CuSO4+FeSO4；⑤FeSO4；⑥對(duì)照。結(jié)果表明，CuSO4及FeSO4條

4、件基本不影響壇紫菜自由絲狀體的生長(zhǎng)，而青霉素鈉及青霉素鈉+硫酸鏈霉素條件對(duì)藻體的生長(zhǎng)負(fù)面影響較大，另CuSO4+FeSO4條件也不適合用于除絲狀體中的附生藍(lán)藻。
　　3）除雜-水處理方面：水處理方式包括①暗沉淀；②滅菌；③添加漂白液（0.25ml漂白液/L培養(yǎng)海水）。結(jié)果發(fā)現(xiàn)滅菌海水培養(yǎng)的絲狀體活力最低，其次是漂白海水，而天然海水培養(yǎng)的絲狀體活力是最高的。
　　2.壇紫菜自由絲狀體工廠化種苗培育條件的優(yōu)化。
　　1）生

5、長(zhǎng)條件的優(yōu)化：利用智能光照培養(yǎng)箱對(duì)壇紫菜自由絲狀體生長(zhǎng)的培養(yǎng)條件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。①溫度（15，20，25℃）和鹽度（25，30，35，40，45，50）的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，自由絲狀體的最適培養(yǎng)溫度為20℃左右，最適鹽度范圍為35-40，其中鹽度40更適合絲狀體的生長(zhǎng)，在此溫、鹽條件下，絲狀體最大日特定生長(zhǎng)率可達(dá)8.74%，最大光合活力可達(dá)0.514Y；②接種密度（20，40，60，80，120段/80ml培養(yǎng)液）的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，接種密度為

6、40-60段/80ml培養(yǎng)液均適合自由絲狀體的生長(zhǎng)，其中接種密度40段/80ml培養(yǎng)液更適合自由絲狀體的生長(zhǎng)，在此接種密度下，絲狀體最大日特定生長(zhǎng)率可達(dá)2.05%，最大光合活力可達(dá)0.442Y。
　　2）發(fā)育條件的優(yōu)化：利用人工調(diào)控對(duì)壇紫菜自由絲狀體發(fā)育的培養(yǎng)條件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。①溫度（20，25，27.5，30℃）的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，25-27.5℃均適合自由絲狀體的發(fā)育，其中27.5℃更適合自由絲狀體的發(fā)育，在此溫度下，五周時(shí)間膨大

7、藻絲數(shù)量最大可達(dá)15%，最大光合活力可達(dá)0.513Y；②鹽度（20，25，30，35，40，45）的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，鹽度為40-45均適合自由絲狀體的發(fā)育，其中鹽度40更適合自由絲狀體的發(fā)育，在此鹽度下，五周時(shí)間膨大藻絲數(shù)量最大可達(dá)10%，最大光合活力可達(dá)0.437Y；③接種密度（0.08，0.16，0.32，0.64g/100ml）的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，接種密度為0.08-0.32g/100ml培養(yǎng)液均適合自由絲狀體的發(fā)育，其中0.3

8、2g/100ml培養(yǎng)液更適合自由絲狀體的發(fā)育，在此初始接種密度下，五周時(shí)間膨大藻絲數(shù)量最大可達(dá)10%，最大光合活力可達(dá)0.569Y；④光周期（L:D=8:16，10:14，12:12，16:8）的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，光照時(shí)間為12-16h均適合自由絲狀體的發(fā)育，其中光周期（L:D）16:8h更適合絲狀體的發(fā)育，在此光周期下，四周時(shí)間膨大藻絲數(shù)量最大可達(dá)10%，最大光合活力可達(dá)0.512Y；⑤不同培養(yǎng)時(shí)間的營(yíng)養(yǎng)藻絲為材料（培養(yǎng)二周，三個(gè)半月

9、，四個(gè)月的營(yíng)養(yǎng)藻絲）的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，培養(yǎng)時(shí)間為三個(gè)半月-四個(gè)月的營(yíng)養(yǎng)藻絲均適合自由絲狀體的發(fā)育，其中培養(yǎng)三個(gè)半月的營(yíng)養(yǎng)藻絲更適合自由絲狀體的發(fā)育，在此材料下，五周時(shí)間膨大藻絲數(shù)量最大可達(dá)10%，最大光合活力可達(dá)0.564Y；⑥絲狀體是否純凈（純凈絲狀體和含少量雜藻的絲狀體）的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，培養(yǎng)壇紫菜自由絲狀體在選材及發(fā)育過程中要盡量避免受雜藻污染，否則會(huì)影響轉(zhuǎn)化結(jié)果。
　　3.工廠化培養(yǎng)過程中孢子囊枝發(fā)育停滯原因的探索

10、r>　　在自由絲狀體轉(zhuǎn)化為孢子囊枝的過程中，往往出現(xiàn)孢子囊枝停止發(fā)育，導(dǎo)致最后無法放散殼孢子。本研究選擇了三個(gè)重要的影響因子進(jìn)行了試驗(yàn)，即溫度（27，30，32℃），鹽度（40，45，50），營(yíng)養(yǎng)鹽（0，0.5，1mlF1/L培養(yǎng)海水），結(jié)果發(fā)現(xiàn)工廠化培養(yǎng)孢子囊枝轉(zhuǎn)化最重要的制約因子是溫度。
　　4.壇紫菜自由絲狀體對(duì)低鹽逆境的耐受能力
　　為探討壇紫菜自由絲狀體耐低鹽生理機(jī)制，本研究設(shè)置了低鹽脅迫（5，10，15，20，2