大鼠不同實驗組牙齦卟啉單胞菌rgpB和kgp基因變化的研究.pdf

1、目的：
　　 通過建立大鼠牙周炎模型檢測不同時段的大鼠上頜第一磨牙齦下人工定植的牙齦卟啉單胞菌濃度變化及牙齦素基因rgpB和kgp的改變探討在牙周炎發(fā)展的不同階段牙齦卟啉單胞菌致病基因的變化,為牙周病致病機制的研究提供有益的參考。
　　 材料與方法：
　　 1、研究對象的選擇；
　　 實驗組選擇6周的成年雄鼠13只,平均體重200克。將接種細菌后4周和8周分為實驗兩組,在4周和8周時再取口腔齦下菌斑共獲樣

2、本20例,空白對照組樣本選擇健康,年齡,性別與實驗組均有可比性者3例。選擇牙齦卟啉單胞菌(P.gingivalis,Pg)高毒力株(模式株W83)作為接種定植細菌陽性對照。
　　 2、大鼠牙周炎模型的建立；
　　 每只大鼠選擇2個受試部位,即兩側上頜第一磨牙。麻醉后將大鼠兩個第一磨牙牙齦剝離1毫米左右,用0.2mm鋼絲結扎一周,細菌接種,2天接種一次,連續(xù)接種5次,接種的細菌濃度為1～109CFU/ml。在細菌接種兩周后

3、取大鼠齦下菌斑,BHI培養(yǎng)基培養(yǎng)一周后分離鑒定證明有P.gingivalis存在,從而確定定植細菌成功。
　　 3、提取DNA；
　　 將分別在實驗組,空白對照組獲得的大鼠齦下菌斑采用細菌基因組DNM快速提取試劑盒提取DNA。
　　 4、PCR擴增；
　　 選擇引物針對細菌全基因組DNA,P.gingivalis16SrDNA特異性基因,rgpB催化域的基因(rgpB-cd),kgp催化域的基因(kgp-

4、cd)進行擴增,2％瓊脂糖凝膠電泳檢測,測灰度值。
　　 5、統(tǒng)計學分析；
　　 應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件包進行兩個獨立樣本t檢驗,P＜0.05有顯著性差異。
　　 實驗結果：
　　 1、健康對照組Pg相對灰度值平均為1.85,占總細菌總量的百分比濃度平均為1.45％,實驗4周組Pg相對灰度值平均為143.13,占總細菌總量的百分比濃度平均為66.30％,實驗8周組Pg相對灰度值平均為206.41,占

5、總細菌總量的百分比濃度平均為81.20％,各組兩兩比較均存在顯著性差異。
　　 2、健康對照組kgp相對灰度值平均為0.41,占Pg DNA總量的百分比濃度平均為22.16％。實驗4周組kgp相對灰度值平均為119.28,占Pg DNA總量的百分比濃度平均為83.34％,,實驗8周組kgp相對灰度值平均為168.19,占Pg DNA總量的百分比濃度平均為81.48％,實驗組和健康對照組比較有顯著性差異,4周組和8周組比較無顯著性

6、差異。
　　 3、健康對照組rgpB相對灰度值平均為0.67,占Pg DNA總量的百分比濃度平均為36.22％,實驗4周組rgpB相對灰度值平均為99.76,占Pg DNA總量的百分比濃度平均為69.70％,實驗8周組rgpB相對灰度值平均為145.25,占Pg DNA總量的百分比濃度平均為70.40％,實驗組和健康對照組比較有顯著性差異,4周組和8周組比較無顯著性差異。
　　 結論：
　　 1、通過鋼絲結扎法和

7、人工定植牙齦卟啉單胞菌于大鼠齦溝內(nèi),使大鼠牙周炎模型建立成功。
　　 2、Pg的相對含量在4周和8周存在顯著性差異,說明在大鼠牙周炎發(fā)展過程中Pg在總細菌中所占比例有增高的趨勢。
　　 3、實驗組與健康對照組在rgpB和kgp DNA相對含量上比較,無論4周和8周的rgpB和kgp DNA相對含量均顯著增高,而4周和8周在rgpB和kgpDNA相對含量上比較卻無顯著性差異,推測rgpB基因和kgp基因與牙周炎的致病性有關