RhoC對TGFβ1誘導(dǎo)肺腺癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化影響的研究.pdf

1、目的：Rho GTP酶是一組鳥核苷酸調(diào)節(jié)蛋白，其介導(dǎo)的細(xì)胞運動可能在惡性腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。最近研究發(fā)現(xiàn)，RhoC與Rho家族其它成員相比，與其下游效應(yīng)蛋白ROCK結(jié)合力更強，因而認(rèn)為RhoC對細(xì)胞骨架介導(dǎo)的細(xì)胞運動調(diào)節(jié)能力更強，RhoC的作用可能貫穿于腫瘤轉(zhuǎn)移的全過程。此外，在腫瘤細(xì)胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程中也發(fā)現(xiàn)有細(xì)胞骨架的改變，細(xì)胞具有更強的侵襲和遷移能力。由于RhoC效應(yīng)與EMT的表現(xiàn)存在諸多相似，這種相似性是因為兩者之

2、間具有一定的關(guān)聯(lián)，還是彼此獨立，值得進一步研究。因此本文通過TGFβ1誘導(dǎo)肺腺癌A549細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial mesenchymaltransition，EMT)，研究RhoC對肺腺癌上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)的影響。
　　 方法：利用5ng/ml TGFβ1處理人肺腺癌A549細(xì)胞株，用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，Western-blot檢測上皮表型標(biāo)志蛋白E-cadherin和間質(zhì)表型標(biāo)志蛋白Viment

3、in的表達(dá)情況，Transwell體外侵襲試驗檢測細(xì)胞侵襲能力的改變以評價細(xì)胞是否發(fā)生間質(zhì)化轉(zhuǎn)換;同時Western-blot方法檢測RhoC蛋白表達(dá)的改變，Pull-down assay分析RhoC活性的變化;在TGFβ1處理細(xì)胞前后向細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)入RhoCshRNA，通過觀察細(xì)胞的形態(tài)，檢測E-cadherin和Vimentin蛋白的表達(dá)和細(xì)胞侵襲能力的改變，分析抑制RhoC表達(dá)對EMT的影響。
　　 結(jié)果：經(jīng)TGFβ1處理48

4、h后，A549細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯改變，E-cadherin表達(dá)明顯減低，并出現(xiàn)Vimentin蛋白表達(dá)升高，體外侵襲實驗提示細(xì)胞侵襲能力明顯增強，說明細(xì)胞發(fā)生了EMT。與此同時RhoC的表達(dá)和活性增強，抑制RhoC的表達(dá)能明顯降低細(xì)胞的體外侵襲能力。用RhoC shRNA處理A549細(xì)胞48h，再用5ng/ml TGFβ1處理A549細(xì)胞48h后細(xì)胞內(nèi)并沒有出現(xiàn)EMT的特征性表現(xiàn);在5ng/ml TGFβ1處理A549細(xì)胞48h后，再用R