西奧骨化醇抑制TGF-β1誘導的肝癌細胞SMMC-7721上皮-間質轉化.pdf

1、背景和目的:
　　肝癌是目前全球最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率在惡性腫瘤居中第五位，全世界每年新發(fā)現(xiàn)的肝癌患者達六十萬例。其治療困難，病死率高，臨床上治療手段繁多，但手術仍然是綜合治療的主導方式。對于晚期肝癌的患者，手術失去意義，而導致這一結果重要原因是腫瘤對周圍組織的侵襲和腫瘤細胞的遠處轉移。研究表明，上皮-間質轉化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）能促進肝癌的侵襲和轉移，而抑制EMT

2、成為抑制腫瘤侵襲轉移的新途徑。
　　西奧骨化醇（seocalcitol,EB1089）是一種新研制的維生素D類似物，研究表明其不但能夠有效誘導腫瘤細胞凋亡，還可顯著抑制腫瘤細胞的增殖，具有對機體血鈣影響小的優(yōu)勢，若能通過實驗證實EB1089通過抑制腫瘤細胞發(fā)生EMT來抑制其侵襲和遷移能力，將為西奧骨化醇應用于臨床治療惡性腫瘤提供實驗基礎及理論依據(jù)。本文通過研究EB1089對轉化生長因子-β1（transforming growth

3、 factor-β1 TGF-β1）誘導肝癌細胞SMMC-7721上皮-間質轉化的影響，為其抑制肝癌侵襲轉移提供新的證據(jù)，并進一步探討其抗肝癌作用的可能機制。
　　方法：
　　常規(guī)培養(yǎng)SMMC-7721細胞，用1nmol/L EB1089、10nmol/L EB1089、100nmol/L EB1089、1000nmol/L EB1089作用于SMMC-7721細胞6、12、24、48h，篩選出具有統(tǒng)計學意義的作用濃度和時間

4、。根據(jù)濃度、時間篩選結果將SMMC-7721細胞分為4個處理組（1000nmol/L EB1089組、10ng/mLTGF-β1組、10ng/mLTGF-β1+1000nmol/LEB1089組和空白對照組)，分別作用48h。用顯微鏡觀察四個處理組細胞形態(tài)改變情況；采用RT-PCR檢測處理組細胞上皮標志性蛋白E-cadherin的mRNA表達量差異、間質特征性蛋白N-cadherin、Vimentin的mRNA表達量差異；Western

5、 blot檢測處理組細胞E-cadherin、N-cadherin及Vimentin蛋白表達差異；遷移實驗和侵襲實驗檢測四個不同處理組SMMC-7721細胞侵襲能力和遷移能力。通過對處理組細胞形態(tài)變化和相關蛋白表達情況研究，明確EB1089對TGF-β1誘導肝癌細胞發(fā)生EMT的影響。遷移和侵襲實驗進一步明確EB1089對肝癌細胞生物學特性的調節(jié)作用。
　　結果：
　　1.1000nmo/L EB1089作用48h時，SMMC

6、-7721細胞E-cadherin蛋白表達相對于對照組差異最為顯著（P＜0.05），為理想的作用濃度和時間。
　　2.TGF-β1作用后SMMC-7721細胞由原來的不規(guī)則多邊形變?yōu)殚L梭行，并伸出較多觸角，EB1089能明顯抑制這種形態(tài)變化。實時RT-PCR及Western blot顯示：EB1089可有效抑制TGF-β1所致的E-cadherin mRNA和蛋白表達下降(P＜0.05)，同時降低N-cadherin、Viment