西奧骨化醇抑制TGF-β1誘導的肝癌細胞SMMC-7721上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、背景和目的:
  肝癌是目前全球最常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率在惡性腫瘤居中第五位,全世界每年新發(fā)現(xiàn)的肝癌患者達六十萬例。其治療困難,病死率高,臨床上治療手段繁多,但手術(shù)仍然是綜合治療的主導方式。對于晚期肝癌的患者,手術(shù)失去意義,而導致這一結(jié)果重要原因是腫瘤對周圍組織的侵襲和腫瘤細胞的遠處轉(zhuǎn)移。研究表明,上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)能促進肝癌的侵襲和轉(zhuǎn)移,而抑制EMT

2、成為抑制腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的新途徑。
  西奧骨化醇(seocalcitol,EB1089)是一種新研制的維生素D類似物,研究表明其不但能夠有效誘導腫瘤細胞凋亡,還可顯著抑制腫瘤細胞的增殖,具有對機體血鈣影響小的優(yōu)勢,若能通過實驗證實EB1089通過抑制腫瘤細胞發(fā)生EMT來抑制其侵襲和遷移能力,將為西奧骨化醇應(yīng)用于臨床治療惡性腫瘤提供實驗基礎(chǔ)及理論依據(jù)。本文通過研究EB1089對轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transforming growth

3、 factor-β1 TGF-β1)誘導肝癌細胞SMMC-7721上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響,為其抑制肝癌侵襲轉(zhuǎn)移提供新的證據(jù),并進一步探討其抗肝癌作用的可能機制。
  方法:
  常規(guī)培養(yǎng)SMMC-7721細胞,用1nmol/L EB1089、10nmol/L EB1089、100nmol/L EB1089、1000nmol/L EB1089作用于SMMC-7721細胞6、12、24、48h,篩選出具有統(tǒng)計學意義的作用濃度和時間

4、。根據(jù)濃度、時間篩選結(jié)果將SMMC-7721細胞分為4個處理組(1000nmol/L EB1089組、10ng/mLTGF-β1組、10ng/mLTGF-β1+1000nmol/LEB1089組和空白對照組),分別作用48h。用顯微鏡觀察四個處理組細胞形態(tài)改變情況;采用RT-PCR檢測處理組細胞上皮標志性蛋白E-cadherin的mRNA表達量差異、間質(zhì)特征性蛋白N-cadherin、Vimentin的mRNA表達量差異;Western

5、 blot檢測處理組細胞E-cadherin、N-cadherin及Vimentin蛋白表達差異;遷移實驗和侵襲實驗檢測四個不同處理組SMMC-7721細胞侵襲能力和遷移能力。通過對處理組細胞形態(tài)變化和相關(guān)蛋白表達情況研究,明確EB1089對TGF-β1誘導肝癌細胞發(fā)生EMT的影響。遷移和侵襲實驗進一步明確EB1089對肝癌細胞生物學特性的調(diào)節(jié)作用。
  結(jié)果:
  1.1000nmo/L EB1089作用48h時,SMMC

6、-7721細胞E-cadherin蛋白表達相對于對照組差異最為顯著(P<0.05),為理想的作用濃度和時間。
  2.TGF-β1作用后SMMC-7721細胞由原來的不規(guī)則多邊形變?yōu)殚L梭行,并伸出較多觸角,EB1089能明顯抑制這種形態(tài)變化。實時RT-PCR及Western blot顯示:EB1089可有效抑制TGF-β1所致的E-cadherin mRNA和蛋白表達下降(P<0.05),同時降低N-cadherin、Viment

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