懷地黃脫毒快繁及應(yīng)用技術(shù)研究.pdf

1、本文對(duì)懷地黃的脫毒快繁及其應(yīng)用技術(shù)進(jìn)行了系統(tǒng)的研究。結(jié)果表明：(1)適宜的脫毒培養(yǎng)方式是切離0.2～0.5mm大小的莖尖，置于MS+6.BA 0.5或MS+KT 0.5培養(yǎng)基上培養(yǎng)，待長(zhǎng)成苗后，37℃熱處理6周，然后二次切離莖尖(0.2～0.5mm)，培養(yǎng)成苗。成苗率達(dá)75％，脫毒率達(dá)96～100％。(2)快速繁殖最適宜的培養(yǎng)基是MS+BA 0.2+NAA0.002～0.02，放置于500ml罐頭瓶中進(jìn)行固體培養(yǎng)。(3)用罐頭瓶代替三角

2、瓶，1/2MS基本培養(yǎng)基代替MS基本培養(yǎng)基，白砂糖代替蔗糖，蘑菇袋代替封口膜，可大大降低試管苗的生產(chǎn)成本。(4)在脫毒苗壯苗生根時(shí)，采用1/2MS+PP<,333> 0.5，加入3％的白砂糖進(jìn)行培養(yǎng)，其壯苗生根效果最好；移栽時(shí)苗根系發(fā)達(dá)，葉色濃綠，莖桿粗壯，移栽成活率達(dá)100％。移栽基質(zhì)蛭石好于珍珠巖，在室外煉苗效果好于室內(nèi)，其移栽成活率可達(dá)97.89％。(5)脫毒苗的大田產(chǎn)量明顯提高，比大田種植苗增產(chǎn)103.57％。(6)病毒檢測(cè)：①

3、指示植物法檢測(cè)病毒，接種一個(gè)月后表現(xiàn)出典型癥狀；②電鏡法檢測(cè)，觀察到了CMV，呈典型球狀，直徑約30nm；③RT-PCR法檢測(cè)CMV和TMV，分別擴(kuò)增出了預(yù)期特異性片斷300bp和280bp；④IC-RT-PCR法檢測(cè)TMV，也擴(kuò)增出了預(yù)期片段(280bp)，經(jīng)測(cè)序檢驗(yàn)，氨基酸同源性達(dá)96.7％。共檢測(cè)株系42株，其中有18株脫去了病毒。本試驗(yàn)建立了一整套懷地黃脫毒快繁及病毒檢測(cè)體系，獲得了脫毒苗并提高了大田產(chǎn)量，為懷地黃脫毒苗的工廠化