Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子在百草枯中毒大鼠中的表達(dá)及意義.pdf

1、研究目的:
　　觀察百草枯中毒大鼠中毒反應(yīng)及組織病理學(xué)改變，研究Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子在百草枯中毒大鼠體內(nèi)表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化及意義，初步探討百草枯致病的免疫毒性。
　　研究方法:
　　SPF級Wistar大鼠96只，雌、雄各半，隨機(jī)分為三組:正常對照組、PQ中毒組、IL-17抗體組。采用一次性經(jīng)口灌胃染毒方式（50mg/kg）建立大鼠百草枯中毒模型，IL-17抗體組給予腹腔注射大鼠IL-17中和抗體（3μg/只），正常對

2、照組及PQ中毒組給予等量生理鹽水。觀察大鼠中毒反應(yīng)，并在第1、3、7、21天四個(gè)時(shí)間點(diǎn)分別采集大鼠外周血，處死大鼠，解剖、分離肺組織。光鏡下觀察大鼠肺組織病理學(xué)改變。采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA法）檢測各時(shí)間點(diǎn)大鼠血清白介素-17(IL-17)、白介素-6（IL-6）、轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)含量，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real time PCR)法測定大鼠肺組織中Th17細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子維甲酸孤獨(dú)核相關(guān)受體(RORγt)

3、mRNA的表達(dá)水平。
　　研究結(jié)果:
　　一、 Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子在百草枯中毒大鼠體內(nèi)的表達(dá)
　　1一般情況PQ中毒組大鼠出現(xiàn)嚴(yán)重中毒反應(yīng)，體重出現(xiàn)明顯下降，7天后體重開始增加，與正常對照組相比，各時(shí)間點(diǎn)體重均明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　2肺組織病理學(xué)觀察正常對照組肺組織結(jié)構(gòu)基本正常。PQ中毒組早、中期主要為充血、水腫及大量中性粒細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞浸潤等急性肺泡炎的表現(xiàn)，第3天炎癥表現(xiàn)

4、最為明顯;晚期大部分肺泡結(jié)構(gòu)破壞，肺泡腔擴(kuò)張融合，肺泡間隔明顯增厚，可見成纖維細(xì)胞增多和膠原纖維增生。
　　3血清Th17相關(guān)細(xì)胞因子含量
　　(1)血清IL-17含量:與正常對照組相比較，PQ中毒組各時(shí)間點(diǎn)血清IL-17含量均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);
　　(2)血清IL-6含量:與正常對照組相比較，PQ中毒組各時(shí)間點(diǎn)血清IL-6含量升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);
　　(3)血清T

5、GF-β含量:與正常對照組比較，PQ中毒組各時(shí)間點(diǎn)血清TGF-β含量均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　4肺組織RORγtmRNA表達(dá)水平與正常對照組相比，PQ中毒組各時(shí)間點(diǎn)肺組織RORγt mRNA的表達(dá)水平均升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　二、IL-17A抗體干預(yù)作用
　　1一般情況IL-17抗體組大鼠中毒反應(yīng)較PQ中毒組有所減輕，體重表現(xiàn)為先降低或不增，7天后體重增加，各時(shí)間點(diǎn)體重

6、均高于PQ中毒組。
　　2肺組織病理學(xué)觀察IL-17抗體組大鼠肺組織病變程度較PQ中毒組輕，早、中期出現(xiàn)肺水腫及泡沫細(xì)胞浸潤，部分可見中性粒細(xì)胞浸潤，晚期見肉芽組織生成，未見明顯纖維化。
　　3血清Th17相關(guān)細(xì)胞因子含量
　　(1)血清IL-17含量:與PQ中毒組相比，IL-17抗體組第1、3天血清IL-17含量均明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);第7、21天血清IL-17含量降低無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05

7、）。
　　(2)血清IL-6含量:與PQ中毒組相比較，IL-17抗體組第1、3天血清中IL-6含量明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);第7天和第21天血清IL-6含量降低無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　(3)血清TGF-β含量:與PQ中毒組相比較，IL-17抗體組各時(shí)間點(diǎn)TGF-β均有所降低，第7、21天TGF-β含量降低明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);第1、3天TGF-β含量降低無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.0

8、5)。
　　4肺組織RORγt mRNA表達(dá)水平:與PQ中毒組相比較，IL-17抗體組肺組織RORγtmRNA表達(dá)水平在第1、3、7天明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，第21天肺組織RORγt mRNA表達(dá)水平降低無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　研究結(jié)論:
　　1大鼠PQ灌胃染毒后，血清Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子IL-17、IL-6、TGF-β含量及肺組織特異性轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子RORγt mRNA表達(dá)水平均明顯

9、升高，表明Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子參與了百草枯中毒的致病過程，說明百草枯具有一定的免疫毒性。
　　2應(yīng)用大鼠IL-17抗體干預(yù)后，大鼠的中毒反應(yīng)有所減輕，肺組織病理學(xué)觀察:與PQ中毒組比較，IL-17抗體組充血、水腫程度減輕，肺泡內(nèi)部分中性粒細(xì)胞及泡沫細(xì)胞浸潤;晚期有肉芽組織形成，但未見明顯纖維化。
　　3應(yīng)用IL-17抗體干預(yù)中毒大鼠能夠不同程度的降低大鼠血清中IL-17、IL-6、TGF-β含量及肺組織中RORγt mR