靶向Bcl-2小分子化合物納米懸混液對堿燒傷誘導(dǎo)的大鼠角膜新生血管的抑制作用及其作用機(jī)制研究.pdf

1、目的:檢測靶向Bcl-2小分子化合物納米懸混液(Z24-NS)在眼部應(yīng)用安全性基礎(chǔ)上,觀察Z24-NS對大鼠角膜堿燒傷后角膜新生血管(cornealneovascularization,CNV)增殖的影響,并初步探討其抑制效應(yīng)及其可能的機(jī)制,為將來Z24-NS滴眼液應(yīng)用于臨床奠定理論基礎(chǔ)。
　　方法:
　　1.8只SD大鼠隨機(jī)分為Z24組和生理鹽水組兩組,每組4只(4眼)。Z24組左眼滴2％的Z24-NS,生理鹽水組左眼滴0

2、.9%的生理鹽水。連續(xù)滴眼14天,通過行為學(xué)觀察、裂隙燈顯微鏡檢查、制作病理切片,觀察光鏡下角膜病理學(xué)改變,檢測2%Z24-NS滴眼液有無明顯毒副作用。
　　2.36只SD大鼠,采用浸潤1mol/LNaOH的3×3mm濾紙貼附左眼角膜中央40s的方法制作大鼠角膜堿燒傷誘導(dǎo)CNV模型,并隨機(jī)分為Z24-NS滴眼液治療組、地塞米松磷酸鈉滴眼液陽性對照組以及空白組三組,每組12只(12眼)。Z24組左眼滴2%的Z24-NS,地米組左眼滴

3、0.1%地塞米松磷酸鈉滴眼液,每日4次,空白組不做任何處理。實驗周期為14天。在堿燒傷后3天、7天、14天通過裂隙燈顯微鏡檢查及照相定性、定量觀察各組的CNV生長情況并計算CNV面積、角膜混濁程度、炎癥反應(yīng)和前房反應(yīng)。
　　3.堿燒傷后14天在第二部分的基礎(chǔ)上通過病理組織學(xué)觀察及計算機(jī)圖像分析系統(tǒng)分析各組角膜情況,檢測各組角膜組織中炎癥細(xì)胞的數(shù)量、微血管密度,通過免疫組織化學(xué)方法、RT-PCR和WesternBlot檢測大鼠角膜V

4、EGF及其受體Flk-1和Bcl-2的mRNA和蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　1.短期局部應(yīng)用2%的Z24-NS滴眼后大鼠無明顯甩頭、撓抓眼部現(xiàn)象,大鼠無角膜混濁、水腫,角膜上皮無明顯缺損,組織學(xué)檢查顯示結(jié)構(gòu)正常,未見炎癥細(xì)胞浸潤。
　　2.堿燒傷后3、7、14天Z24組和地塞米松組CNV面積、炎癥指數(shù)及角膜混濁程度均小于空白組(P<0.01或P<0.05)。與地塞米松組比較,2%的Z24-NS抑制CNV程度、炎癥

5、指數(shù)及角膜混濁程度差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　3.堿燒傷后14天Z24組和地塞米松組角膜組織中炎癥細(xì)胞的數(shù)量、微血管密度均小于空白組(P<0.01或P<0.05),VEGF、Flk-1及Bcl-2蛋白及mRNA表達(dá)明顯低于空白組(P<0.05),而2%的Z24-NS與地塞米松組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。各實驗組VEGF和Flk-1的表達(dá)與MVD的數(shù)量呈正相關(guān)(r1=0.9997,P1=0.015;r2=0.

6、9999,P2=0.011)。
　　結(jié)論:
　　1.2%的Z24-NS滴眼液短期局部應(yīng)用對大鼠的角膜結(jié)構(gòu)無影響,在眼部應(yīng)用是安全的。
　　2.2%的Z24-NS滴眼液對大鼠角膜堿燒傷后CNV的生長具有明顯抑制作用,同時相應(yīng)減輕了角膜混濁程度,其抑制CRNV效果與0.1%地塞米松滴眼液相同。
　　3.2%的Z24-NS滴眼液有一定的抗炎作用,它可以抑制大鼠角膜新生血管模型中角膜VEGF、Flk-1及Bcl-2的表達(dá)