外源性小鼠干擾素誘導(dǎo)蛋白-10在堿燒傷誘導(dǎo)角膜新生血管中的作用研究.pdf

1、背景與目的：
　　 角膜作為重要的屈光介質(zhì)，生理情況下透明、無血管，但在炎癥、外傷、缺氧和水腫等病理狀態(tài)下，保持角膜無血管狀態(tài)的促血管形成因子與抑血管形成因子之間的平衡被打破，周圍毛細(xì)血管就會由角膜緣血管網(wǎng)侵入角膜，形成角膜新生血管(comealneovascularization，CNV)，從而導(dǎo)致視力減退甚至失明。干擾素誘導(dǎo)蛋白-10（interferon-inducibleprotein-10，IP-10）可作為趨化因子介

2、導(dǎo)Th1型炎癥反應(yīng)，也可作為血管新生抑制劑抑制血管生成，抑制腫瘤生長和轉(zhuǎn)移，參與血管重塑等過程。有關(guān)IP-10在CNV中的作用國內(nèi)外尚未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過外源性小鼠IP-10蛋白對堿燒傷后新生血管形成的不同階段進(jìn)行局部干預(yù)，初步探討其對CNV形成的作用及機(jī)制，以期對新生血管性角膜疾病的研究提供理論依據(jù)及治療靶點(diǎn)。
　　 材料與方法：
　　 1、采用浸潤1mol/LNaOH的2x2mm濾紙貼附左眼角膜中央40s的方法制作小

3、鼠角膜堿燒傷誘導(dǎo)CNV模型，角膜堿燒傷后1d及7d開始每日三次局部滴用IP-10蛋白10mg/L共7d分別作為早期實(shí)驗(yàn)組（10眼）和中晚期實(shí)驗(yàn)組（5眼），各自的對照組均予質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.2％透明質(zhì)酸鈉點(diǎn)眼（分別為11眼和6眼）。早期干預(yù)組于造模后2w，中晚期干預(yù)組于造模后3w分離角膜組織，以CD31免疫熒光標(biāo)記法標(biāo)記新生血管，比較對照組及實(shí)驗(yàn)組CNV面積。
　　 2、收集早期干預(yù)第2d及第4d小鼠的角膜組織，用RT-PCR法檢測并比

4、較各組小鼠角膜組織中趨化因子受體3(chemokinereceptor3，CXCR3)、血管內(nèi)皮生長因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)及轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transforminggrowthfactor-β1，TGF-β1)mRNA的表達(dá)情況。
　　 3、分離早期干預(yù)第2d及第4d小鼠的角膜組織，制作鋪片，免疫組織化學(xué)法以F4/80標(biāo)記巨噬細(xì)胞，比較其在角膜組織中的浸潤情況。

5、>　　 結(jié)果：
　　 1、早期干預(yù)對照組小鼠CNV占角膜總面積的比例為（88.67±3.23）%，IP-10實(shí)驗(yàn)組小鼠CNV面積為（70.06±3.68）%，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.77，P=0.0013)。中晚期干預(yù)對照組小鼠CNV占角膜總面積的比例為（87.33±5.50）%，IP-10實(shí)驗(yàn)組CNV面積為(86.56±5.58)%，兩組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=1.26，P＞0.05)。
　　 2、IP-

6、10早期干預(yù)第2d及第4d的小鼠角膜組織中CXCR3表達(dá)較對照組同期值明顯升高（t=3.13、3.07，P＜0.05），VEGF表達(dá)降低(t=5.99、6.27，P＜0.01)，TGF-β1表達(dá)降低（盧8.50，P＜0.01；t=4.53，P＜0.05）。
　　 3、IP-10早期干預(yù)第2d及第4d的小鼠角膜組織中巨噬細(xì)胞的浸潤實(shí)驗(yàn)組與對照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=1.65，P＞0.05；t=0.59，P＞0.05)。