編碼人類vasohibin-1基因的重組腺病毒抑制堿燒傷誘導(dǎo)的小鼠角膜新生血管.pdf

1、目的:觀察小鼠結(jié)膜下注射編碼人類vasohibin-1蛋白的重組腺病毒后,該蛋白對堿燒傷誘導(dǎo)的角膜新生血管(cornea-1 neovascularization,CNV)的作用。
　　 方法:110只balb/c小鼠隨機(jī)分成兩組。治療組小鼠結(jié)膜下注射5ul109pfu編碼人類vasohibin-1蛋白的復(fù)制缺陷型腺病毒(Ad-Vasohibin-1)。對照組小鼠結(jié)膜下注射5ul109pfu腺病毒空載體(AdNull)?？瞻讓φ?/p>

2、組10只,不進(jìn)行任何處理。結(jié)膜下注射5天后,所有小鼠右眼角膜中央采用2.5ul0.1 N NaOH燒灼30秒,誘導(dǎo)角膜新生血管模型。堿燒傷后觀察9天,每3天觀察角膜新生血管生長情況,并照相,計(jì)算新生血管占全角膜的比值。分別在以上3個(gè)時(shí)間觀察點(diǎn)每組取3只小鼠行免疫熒光檢測,并分別在堿燒傷前、堿燒傷后3天和9天分別每組取10只小鼠行western blotting檢測,觀察人類vasohibin-1蛋白在角膜組織中的表達(dá)情況。觀察期末,運(yùn)用

3、實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法分析兩組小鼠角膜組織VEGF、及其受體VEGFR1和VEGFR2,以及內(nèi)源性vasohibin-1的基因表達(dá)異同。
　　 結(jié)果:堿燒傷后3、6和9天,治療組角膜新生血管面積比分別為7.11％±3.91％、31.64％±4.71％和45.02％±9.98％,對照組分別為15.48％±1.79％、43.93％±6.15％和66.24％±7.17％。與對照組相比,結(jié)膜下注射Ad-Vasohibin-1的治療組

4、角膜新生血管在堿燒傷后的每個(gè)觀察點(diǎn)明顯減少(均P=0.000)。堿燒傷后3天,vasohibin-1蛋白明顯表達(dá)于上皮下基質(zhì)內(nèi),高度集中在新生血管區(qū)域。有的vasohibin-1蛋白散在分布于角膜中央的基質(zhì)淺層和深層,而非集中在新生血管區(qū)。相比,結(jié)膜下注射AdNull組的小鼠角膜及正常角膜不表達(dá)人類vasohibin-1蛋白。結(jié)膜下注射Ad-Vasohibin-15天后,堿燒傷前,westernblotting檢測到角膜組織表達(dá)人類va

5、sohibin-1蛋白,堿燒傷后3天達(dá)到高峰,一直持續(xù)高表達(dá)至堿燒傷后9天。而空載體組及正常對照組不表達(dá)。治療組VEGFR2和內(nèi)源性vasohibin-1的基因表達(dá)水平顯著低于對照組(t1=-2.161,P1=0.047；t2=-2.236,P2=0.041)。兩組相比,VEGF和VEGFR1的基因表達(dá)水平?jīng)]有顯著差異(均P>0.05)。
　　 結(jié)論:結(jié)膜下注射編碼人類vasohibin-1基因的重組腺病毒顯著減少堿燒傷誘導(dǎo)的角