Rab25與ERK在骨肉瘤中的表達(dá)及其意義.pdf

1、骨肉瘤(Osteosarcoma)是好發(fā)于青少年的一種惡性腫瘤，該瘤惡性程度甚高，預(yù)后極差，可于短期內(nèi)轉(zhuǎn)移。與其他腫瘤一樣，骨肉瘤發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多基因多階段過(guò)程，尋找其發(fā)生發(fā)展中的關(guān)鍵基因并進(jìn)行阻斷和干預(yù)是目前的研究重點(diǎn)。
　　 Rab25定位于染色體1q22，是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的Ras癌基因家族的亞家族Rab中的一員，與Rab11具有同源性，參與細(xì)胞的動(dòng)力過(guò)程。既往研究發(fā)現(xiàn)Rab25在卵巢癌、乳腺癌組織中表達(dá)高于其他組織，認(rèn)為Rab

2、25有可能成為卵巢癌治療的又一新途徑，已有研究顯示Rab25與腫瘤的發(fā)生和預(yù)后密切相關(guān)。
　　 ERK是絲裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinases，MAPK)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的一個(gè)重要成員，參與細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化、轉(zhuǎn)移全過(guò)程，在多種腫瘤組織中高表達(dá)。
　　 目的
　　 檢測(cè)骨肉瘤及其癌旁組織中Rab25和ERK mRNA及蛋白的表達(dá)水平差異，分析兩者之間關(guān)系及其對(duì)骨肉瘤發(fā)生

3、發(fā)展的影響，為尋找骨肉瘤早期診斷和治療的特異性靶點(diǎn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法
　　 1.標(biāo)本收集：骨肉瘤及其瘤旁組織均取自鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院、河南大學(xué)第一附屬醫(yī)院和河南大學(xué)淮河醫(yī)院，所有患者均簽訂知情同意書?；颊吣挲g13-26歲，其中普通型骨肉瘤18例、毛細(xì)血管擴(kuò)張型骨肉瘤9例、小細(xì)胞骨肉瘤3例。癌及癌旁正常組織均經(jīng)病理學(xué)診斷。
　　 2.RT-PCR(反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng))：參照《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》方法提取組織

4、RNA，取同等量RNA依照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄并擴(kuò)增。
　　 3.Western blot：參照《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》方法提取組織蛋白，并進(jìn)行抗體印跡實(shí)驗(yàn)，用DAB顯色、用ECL(化學(xué)發(fā)光法)法曝光顯色。
　　 4.半定量分析：蛋白和mRNA均以β-actin為內(nèi)參，應(yīng)用Bioimaging System成像分析系統(tǒng)掃描目的條帶的灰度，檢測(cè)骨肉瘤及其癌旁組織的Rab25和ERK mRNA和蛋白的表達(dá)水平。
　　

5、 5.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：所獲資料采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS13.0軟件處理，兩組間的均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，率的比較采用卡方檢驗(yàn)，顯著性水準(zhǔn)取P<0.05。
　　 結(jié)果
　　 1.Rab25 mRNA在骨肉瘤組織的相對(duì)表達(dá)量為0.5231±0.1331，癌旁組織的相對(duì)表達(dá)量為0.1226±0.0115，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，ERK mRNA在骨肉瘤組織的相對(duì)表達(dá)量為0.4632±0.1237，在癌旁組織中的相對(duì)表達(dá)量為0.

6、1134±0.0193，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 2.Rab25蛋白骨肉瘤組織的相對(duì)表達(dá)量為0.4326±0.1058，癌旁組織的相對(duì)表達(dá)量為0.1024±0.0145，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，ERK蛋白骨肉瘤組織的相對(duì)表達(dá)量為0.5466±0.1895，在癌旁組織中的相對(duì)表達(dá)量為0.1256±0.0111，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 3.不同病理類型的骨肉瘤組織Rab25和ERK