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文檔簡介
1、目的:探討 RhoE在誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細胞凋亡中的作用,為膠質(zhì)瘤分子靶向治療尋找新的靶點提供新方法。
方法:采用western blotting檢測RhoE在人腦膠質(zhì)瘤細胞系(人多形性惡性膠質(zhì)瘤細胞-T98、人膠質(zhì)母細胞瘤細胞-A172、人腦星形膠質(zhì)母細胞瘤細胞-U87)中的表達水平;構(gòu)建重組pcDNA3.1-RhoE真核表達載體,將質(zhì)??焖俎D(zhuǎn)染U87細胞,采用四唑鹽法檢測細胞增殖能力的變化;Hoechst染色法觀察細胞核的形態(tài)改變
2、;流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡的情況;western blotting分析細胞Bcl-2、Bax表達變化,以及capase-3和NF-κB的活化水平。
結(jié)果:
1、RhoE蛋白在T98、A172和U87細胞系中表達明顯低于正常人腦膠質(zhì)細胞(P<0.05);
2、上調(diào)RhoE表達后,U87細胞增殖能力明顯下降(P<0.05),并且發(fā)生了顯著的細胞凋亡改變(P<0.05);
3、上調(diào)RhoE表達后,west
3、ern bolt檢測顯示裂解的caspase-3水平增加、Bcl-2表達水平下降、Bax的表達水平升高;
4、上調(diào)RhoE表達后,NF-κB亞單位p65在細胞核中的表達降低。
結(jié)論:RhoE分子可能在膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展中起重要作用,上調(diào)RhoE的表達水平能夠有效抑制U87細胞增殖和誘導(dǎo)細胞凋亡。RhoE可能通過抑制NF-κB的活性,下調(diào)Bcl-2/Bax的比例,從而促進caspase-3的活化,最后誘導(dǎo)U87細胞發(fā)生凋亡
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