PTD4-Apoptin融合蛋白對(duì)人源非小細(xì)胞肺癌抑瘤效應(yīng)的研究.pdf

1、第一部分：
　　目的:以人源非小細(xì)胞肺癌A549、NCI-H1299細(xì)胞為腫瘤模型,通過(guò)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)觀察PTD4-Apoptin融合蛋白對(duì)人源非小細(xì)胞肺癌的抑瘤效應(yīng)。
　　方法:PTD4-Apoptin融合蛋白處理體外培養(yǎng)的人源非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞A549、NCI-H1299和臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC,采用MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖、AnnexinV-FITC/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡;建立人源非小細(xì)胞肺癌A549異種移植瘤裸鼠模型,

2、采用PTD4-Apoptin融合蛋白瘤體皮膚表面涂抹方式治療荷瘤裸鼠,同時(shí)設(shè)涂抹PTD4-GFP蛋白和PBS對(duì)照組,觀察PTD4-Apoptin融合蛋白對(duì)A549荷瘤裸鼠腫瘤的生長(zhǎng)抑制效果,HE染色觀察PTD4-Apoptin組裸鼠主要臟器病理形態(tài)改變。
　　結(jié)果:PTD4-Apoptin融合蛋白可抑制體外培養(yǎng)的A549和NCI-H1299細(xì)胞增殖并促使其凋亡,且呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系。A549荷瘤裸鼠皮下瘤生長(zhǎng)曲線顯示,融合蛋白涂抹

3、前治療組和對(duì)照組的腫瘤體積大小不存在差異,經(jīng)PTD4-Apoptin融合蛋白涂抹治療后,PTD4-Apoptin治療組裸鼠的腫瘤生長(zhǎng)速度比對(duì)照組慢,治療21天后,治療組和對(duì)照組的瘤塊體積的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,PTD4-Apoptin治療組裸鼠主要臟器HE染色未見(jiàn)細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯改變。
　　結(jié)論:PTD4-Apoptin融合蛋白可以通過(guò)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的方式抑制體外培養(yǎng)的人源非小細(xì)胞肺癌A549、NCI-H1299細(xì)胞的生長(zhǎng);PTD

4、4-Apoptin融合蛋白可抑制A549荷瘤裸鼠腫瘤的生長(zhǎng)。
　　第二部分：
　　目的:探討注射靶向ADAM10的shRNA對(duì)鼠源宮頸癌細(xì)胞U14荷瘤小鼠腫瘤生長(zhǎng)的影響。
　　方法:建立宮頸癌U14昆明小鼠荷瘤動(dòng)物模型,采用癌旁注射的方式將pGenesil1-ADAM10shRNA表達(dá)載體注入小鼠體內(nèi),以注射載有ADAM10干擾片斷無(wú)意義序列HK的pGenesil4-HKshRNA和注射生理鹽水為對(duì)照。注射21天后處死

5、小鼠并剝離腫瘤,采用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)U14荷瘤小鼠腫瘤組織中ADAM10蛋白的表達(dá),繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線。
　　結(jié)果:注射pGenesil1-ADAM10shRNA質(zhì)粒組、注射pGenesil4-HKshRNA質(zhì)粒組和注射生理鹽水組腫瘤生長(zhǎng)速度明顯不同,注射pGenesil4-HKshRNA質(zhì)粒和注射生理鹽水的對(duì)照組腫瘤生長(zhǎng)速度明顯比實(shí)驗(yàn)組快。免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示注射pGenesil1-ADAM10shRNA質(zhì)粒的小鼠腫瘤組