CMS030對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療作用機理的探討.pdf

1、本文目的為研究四肽化合物CMS030對大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎的治療作用，并初步探討其是否通過抑制滑膜細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖及炎癥因子的分泌、黏附因子的表達(dá)等機制發(fā)揮作用，為此四肽化合物的臨床應(yīng)用奠定實驗基礎(chǔ)。 首先，應(yīng)用MTT比色法觀察CMS030對體外培養(yǎng)人淋巴細(xì)胞增殖的抑制作用；并通過測定細(xì)胞培養(yǎng)上清IFN γ水平，觀察其對T淋巴細(xì)胞功能的影響，進(jìn)一步證實CMS030免疫抑制作用。其次，建立大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎(AA)動物模型；測量

2、各組大鼠的踝關(guān)節(jié)周長，觀察CMS030對AA大鼠原發(fā)性及繼發(fā)性踝關(guān)節(jié)腫脹的抑制作用；HE染色觀察CMS030對AA大鼠踝關(guān)節(jié)病理改變的抑制作用；MTT比色法觀察CMS030對AA大鼠T淋巴細(xì)胞增殖的抑制作用。再次，建立類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人滑膜細(xì)胞體外原代培養(yǎng)的體系，用MTlT比色法觀察CMS030對滑膜細(xì)胞增殖的抑制作用；ELISA法測定細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-1β、TNF-α和VEGF水平，觀察CMS030對滑膜細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的影響。最后

3、，建立人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)體外原代培養(yǎng)的體系，MTT比色法觀察CMS030對HUVEC增殖的抑制作用；cell-ELISA 法觀察CMS030對HUVEC表面表達(dá)粘附分子ICAM-1 和 VCAM-1的抑制作用。 實驗結(jié)果顯示：CMS030 在體外給藥劑量為0.01～100μg/ml 之間均能抑制PHA 誘導(dǎo)的 T 淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)，抑制率為24.0％～45.7％， CMS030(0.01～100μg/ml)作用4

4、8小時能抑制T淋巴細(xì)胞分泌 IFNγ，抑制率分別為14.4％，19.8％，27.4％，32.3％，45.4％，與對照組相比，有顯著性差異 (P<0.01)。CMS030 給藥劑量為 2μg/kg/d～20μg/kg/d，腹腔注射給藥8天后，可以減輕AA大鼠致炎側(cè)及對側(cè)踝關(guān)節(jié)腫脹，與生理鹽水組比較，有顯著性差異(P<0.05)。CMS030 能抑制AA大鼠T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能，與生理鹽水組比較，有顯著性差異(P<0.05)。病理結(jié)果顯示CM

5、S030能改善踝關(guān)節(jié)的滑膜增生，炎細(xì)胞浸潤及血管形成，減輕軟骨的破壞。CMS030在體外給藥劑量為1～100μg/ml時能明顯滑膜細(xì)胞的增殖(P<0.05或P<0.01)，最高抑制率達(dá)33.6％；CMS030 給體外藥劑量為 0.1～10μg/ml能抑制人滑膜細(xì)胞LPS誘導(dǎo)的IL-1β和TNF-α分泌水平，并呈藥物劑量依賴性； CMS030給體外藥劑量為1～100μg/ml能抑制人滑膜細(xì)胞基礎(chǔ)的及TNF-α誘導(dǎo)的VEGF分泌(P<0.0

6、5)，但對IL-1β誘導(dǎo)的人滑膜細(xì)胞分泌 VEGF無明顯抑制作用(P>0.05)。CMS030在給體外給藥劑量為0.1～100μg/ml時，能明顯抑制VEGF誘導(dǎo)的HUVEC增殖(P<0.05或P<0.01)；CMS030 體外給藥劑量為1～100μtg/ml時，能明顯抑制TNF-α誘導(dǎo)的HUVEC 表達(dá)粘附分子ICAM-1(P<0.05，P<0.01)，CMS030 給藥劑量為100μg/ml 時，能明顯抑制TNF-α誘導(dǎo)的HUVEC