海水干預(yù)誘導(dǎo)人肺泡上皮細(xì)胞低氧誘導(dǎo)因子-1α表達(dá)的研究.pdf

1、目的:
　　建立海水淹溺肺損傷的細(xì)胞模型,通過觀察海水干預(yù)后肺泡上皮細(xì)胞HIF-1α蛋白的表達(dá)變化及其與細(xì)胞損傷程度、炎性因子表達(dá)的相互關(guān)系,初步探討HIF-1α在SWD-ALI中的可能作用。
　　方法:
　　肺泡上皮細(xì)胞來源的A549細(xì)胞系,分為正常對照組(C)和海水處理組(S)。C組用新鮮培養(yǎng)基常規(guī)培養(yǎng),S組經(jīng)滅菌配方海水孵育0.5h、1h、2h、4h、8h。
　　1、光鏡觀察瑞氏-吉姆薩染色后細(xì)胞形態(tài)變化。

2、
　　2、MTT檢測細(xì)胞增殖。
　　3、蛋白免疫印記法檢測各組細(xì)胞HIF-1α蛋白的表達(dá)。
　　4、放射免疫法檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中TNF-α、IL-6的含量。
　　結(jié)果:
　　1、海水處理后A549細(xì)胞失去正常長梭形或多角形形態(tài),細(xì)胞變圓、胞體變小,部分細(xì)胞出現(xiàn)核濃縮、深染、核碎裂表現(xiàn)。
　　2、與對照組相比,海水處理組A549細(xì)胞的生長曲線發(fā)生變化,海水干預(yù)0.5h、1h組細(xì)胞生長抑制率較對照組比較

3、無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05),海水干預(yù)2h、4h、8h組細(xì)胞生長抑制率較對照組比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01);細(xì)胞生長至48h和72h時,海水干預(yù)4h組細(xì)胞生長抑制率較2h組有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05),海水干預(yù)8h組細(xì)胞生長抑制率較4h組有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)。
　　3、與對照組相比,HIF-1α在海水干預(yù)1h后開始升高,2h時升高明顯(P<0.01),4h達(dá)高峰(P<0.01),此后HIF-1α蛋白表達(dá)逐漸下降,但仍顯

4、著高于對照組(P<0.01)。
　　4、TNF-α與IL-6在海水干預(yù)1h后開始升高,2h達(dá)高峰(P<0.01),4h及8h組較對照組比較無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　結(jié)論:
　　1、海水干預(yù)導(dǎo)致肺泡上皮細(xì)胞發(fā)生了不同程度的損傷,海水長時間干預(yù)可導(dǎo)致肺泡上皮細(xì)胞生長受抑。
　　2、海水干預(yù)可誘導(dǎo)肺泡上皮細(xì)胞TNF-α、IL-6的表達(dá),海水干預(yù)后肺泡上皮細(xì)胞發(fā)生了炎癥反應(yīng)。
　　3、海水干預(yù)可誘導(dǎo)肺泡上皮細(xì)胞HIF-1