動脈粥樣硬化形成過程中Apelin-13的影響及其作用機制.pdf

1、目的：以人主動脈平滑肌細胞(HASMC)和人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)為體外細胞模型，研究apelin-13對人主動脈平滑肌細胞增殖和遷移的影響，以及對人臍靜脈內(nèi)皮細胞中細胞間粘附分子(ICAM-1)和血管細胞粘附分子(VCAM-1)表達的影響，目的是為了檢測apelin-13對動脈粥樣硬化形成過程的影響，及其通過的細胞信號通路。
　　 內(nèi)容：培養(yǎng)人主動脈平滑肌細胞(HASMC)，提取總RNA、反轉(zhuǎn)錄、PCR檢測HASMC細胞

2、中是否有APJ-血管緊張素受體相關(guān)的受體蛋(putative receptor protein related to the angiotensin receptor AT1，APJ)的表達，用不同濃度(0.001μM，0.01μM，0.1μM，1μM，10μM)的apelin-13刺激細胞24，48，72小時，MTT比色法觀察apelin-13對人主動脈平滑肌細胞增殖的影響；用不同濃度(0.001μM，0.01μM，0.1μM，1μM

3、，10μM)的apelin-13刺激細胞4小時，通過細胞計數(shù)觀察apelin-13對人主動脈平滑肌細胞遷移的影響。
　　 培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)，提取總RNA、反轉(zhuǎn)錄、PCR檢測HUVEC細胞中是否有APJ的表達，用不同濃度(0.001μM，0.01μM，0.1μM，1μM，2μM)的apelin-13刺激細胞0，3，5，8，12，24小時，尋找apelin-13促進人臍靜脈內(nèi)皮細胞VCAM-1，ICAM-1表達的最

4、佳濃度和最適時間；apelin-13以最適濃度和最適時間和Gi蛋白抑制劑PTX或Gq蛋白抑制劑YM254890共同刺激人臍靜脈內(nèi)皮細胞，以LPS為陽性對照來鑒定apelin-13促VCAM-1，ICAM-1表達所通過受體偶聯(lián)的G蛋白類型；apelin-13與核因子NFκ-B抑制劑BAY11-7082共同刺激細胞，檢測NF-κB在apelin-13促VCAM-1，ICAM-1表達中的作用；用apelin-13與和Gi蛋白抑制劑PTX或Gq

5、蛋白抑制劑,YM254890共同刺激人臍靜脈內(nèi)皮細胞，檢測NF-κB磷酸化情況，進一步檢測受體偶聯(lián)G蛋白類型。
　　 結(jié)果：測序結(jié)果顯示在人主動脈平滑肌細胞和人臍靜脈內(nèi)皮細胞中均有APJ受體表達；MTT、比色法結(jié)果顯示apelin-13不能促使人主動脈平滑肌細胞增殖；traswell法細胞遷移結(jié)果顯示apelin-13不能促使人主動脈平滑肌細胞遷移；Westernblot結(jié)果顯示：apelin-13能夠促使人臍靜脈內(nèi)皮細胞中VC

6、AM-1、ICAM-1的表達，并且在濃度為0.1μM時這種促進作用達到最大值，在時間為8h時這促表達作用達到最大值；在apelin-13促VCAM-1、ICAM-1表達過程中，能促使核因子NF-κB的磷酸化，用apelin-13刺激PTX預處理的細胞時，這種促VCAM-1、ICAM-1表達的作用被抑制，而且用apelin-13刺激PTX預處理的細胞時，核因子NF-κB的磷酸化也被PTX所抑制。
　　 結(jié)論與意義：1)在人主動脈平

7、滑肌細胞和人臍靜脈內(nèi)皮細胞中均有APJ表達。2)apelin-13對人主動脈平滑肌細胞的增殖和遷移沒有影響。3)apelin-13能夠促使人臍靜脈內(nèi)皮細胞中VCAM-1、ICAM-1的表達，apelin-13可能通過Apelin-13受體APJ-Gi蛋白-NF-κB信號通路促ICAM-1表達；Apelin-13可能通過Apelin-13受體APJ-Gi蛋白-NF-κB3信號通路促VCAM-1表達；apelin-13在動脈粥樣硬化形成早期