納洛酮對IL-1β致熱大鼠體溫及下丘腦中cAMP和HSP70含量的影響.pdf

1、發(fā)熱是臨床疾病常見的一種伴隨癥狀。一些細胞因子參與誘發(fā)產熱和引起發(fā)熱。白細胞介素-1β(Interleukin-1β，IL-1β)是目前公認的一種內生致熱原，許多實驗已經證明腦室內給予IL-1β能引起動物發(fā)熱反應。 近些年來許多學者發(fā)現(xiàn)，阿片系統(tǒng)參與介導內生致熱原的發(fā)熱效應。預先中樞或外周給予阿片受體拮抗劑，能夠減弱甚至完全阻斷由IL-1β，腫瘤壞死因子(tumurnecrosisfactor，TNF)，干擾素(interfer

2、on，IFN)、白細胞介素-6(interliukin-6，IL-6)等引起的發(fā)熱效應。納洛酮(Naloxone，Nal)是一種非特異性阿片受體拮抗劑，對機體各型阿片受體均有拮抗作用而無激動活性。 環(huán)磷酸腺苷(cyclicadenosinemonophosphate，cAMP)是調節(jié)細胞功能和突觸傳遞的重要介質，它也是發(fā)熱反應的主要中樞介質。 熱休克蛋白70(HeatShockProtein70，HSP70)是一種非特異

3、性細胞保護蛋白，當機體或組織細胞受到溫熱刺激時能夠迅速誘導其產生，以增強細胞對熱損傷的抵抗能力。 本實驗通過中樞給予非特異性阿片受體拮抗劑納洛酮，觀察其對IL-1β致熱大鼠體溫的影響，并檢測下丘腦中cAMP含量和HSP70表達情況，從而探討阿片受體在細胞因子IL-1β引起發(fā)熱效應中的作用及機制。 材料與方法1.動物和手術健康雄性SD大鼠，體重200～250g，由中國醫(yī)科大學實驗動物中心提供，室溫(22±2)℃，晝夜光照節(jié)

4、律12h：12h，單籠飼養(yǎng)，自由進食水。在鹽酸氯胺酮和鹽酸甲苯噻嗪聯(lián)合腹腔麻醉下，參照大鼠腦立體定位圖譜，用立體定位儀向一側側腦室插入一外徑為1mm的塑料管，用牙科水泥固定，檢測導管通暢后封閉頂端。術后大鼠單籠飼養(yǎng)，常規(guī)喂養(yǎng)一周后進行實驗。實驗前對大鼠進行測溫服習。測量體溫時將數(shù)字溫度計溫度探頭插入大鼠直腸內6cm處，待數(shù)值穩(wěn)定后讀數(shù)，以給藥前1h測得的3次直腸溫的平均值為大鼠基礎體溫。實驗過程中記錄大鼠體溫(0～1h內每隔15min，

5、1～2h內每隔30min，2～8h內每隔60min測量1次)。實驗結束后檢查插管位置，舍掉插管位置不正確的數(shù)據(jù)。 2.cAMP含量測定在IL-1β引起的發(fā)熱高峰時間點將大鼠處死后，取下丘腦組織50mg勻漿，離心，取上清按照cAMP放免測定方法檢測。 3.檢測下丘腦組織HSP70表達水平采用Westernblot方法，取大鼠下丘腦組織，勻漿，離心，取上清進行蛋白定量之后，進行電泳，轉膜，封閉，加抗HSP70抗體、二抗，EC

6、L顯影。 4.數(shù)據(jù)分析Westernblot結果用ChemiImager5500V2.03軟件掃描，用FluorChen2.0軟件定量分析測得IDV值。 數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差(-x±s)表示；體溫變化情況采用△Tco(℃)分析；各組均數(shù)間顯著性差異用t檢驗法檢驗。 實驗結果1.在IL-1β誘導發(fā)熱大鼠中，下丘腦中cAMP含量和HSP70表達水平顯著升高。 2.預先側腦室注射Nal能明顯抑制大鼠IL-1β性發(fā)

7、熱，同時下丘腦中cAMP含量和HSP70表達水平也相應減少。 討論在本實驗中，大鼠側腦室注射IL-1β后，體溫在30分鐘開始升高，給藥后2小時達發(fā)熱高峰，熱程持續(xù)6小時以上，并且也檢測到下丘腦中cAMP含量相應增高，這與以往報道一致。 本實驗觀察到側腦室預先給予非特異性阿片受體拮抗劑Nal明顯抑制了IL-1β性發(fā)熱反應，即阿片受體被Nal拮抗后不能發(fā)揮其作用，使IL-1β的升溫效應減弱或被阻止，這充分說明阿片受體在細胞因

8、子IL-1β誘導機體發(fā)熱效應中起著重要的作用；與此同時大鼠下丘腦中cAMP含量顯著低于IL-1β組(P＜0.01)，提示Nal抑制IL-1β性發(fā)熱可能是通過抑制下丘腦中發(fā)熱介質cAMP的合成來實現(xiàn)的。 在溫度刺激或其他應激的條件下，在原核細胞及真核細胞能夠合成熱休克蛋白(HeatShockProtein，HSP)。近年來的研究發(fā)現(xiàn)細胞產生的HSP形成機體抗熱的保護作用。HSP70作為一種非特異性細胞保護蛋白，具有分子伴侶功能，能

9、夠增強細胞對熱損傷的抵抗能力，并修復熱損傷變形的蛋白質。在本實驗中，側腦室注射IL-1β后，隨著發(fā)熱過程的進展，下丘腦中HSP70的合成含量逐漸增加。預先給予非特異性阿片受體拮抗劑Nal后，抑制了IL-1β性發(fā)熱，并且發(fā)現(xiàn)HSP70合成含量顯著降低(P＜0.01)，進一步證明了阿片受體在IL-1β致熱過程的主要作用及引導發(fā)熱對機體的潛在性影響。 本研究的結果表明，體內阿片系統(tǒng)的激活在IL-1β發(fā)熱效應以及其后HSP70表達起著關