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文檔簡介
1、目的:探討大蒜素和金銀花抗VSV誘導的THP-1,MT-2和WISH細胞凋亡作用及其可能的分子機制. 方法:首先常規(guī)培養(yǎng)THP-1,MT-2和WISH細胞,采用MTT法測定三種藥物對THP-1,MT-2和WISH細胞作用的毒性劑量,并據此分別選取三個不同的安全濃度作為實驗濃度.將細胞分為正常對照組,VSV對照組和藥物預處理+VSV作用組,然后選用三種不同濃度(50、25、10μg/ml的大蒜素;10 mg/ml、5 mg/ml和
2、1 mg/ml金銀花)的藥物預處理三種細胞4 h,再按MOI=10:1(10個病毒感染1個細胞)的病毒量感染各組細胞誘導其凋亡,用倒置顯微鏡觀察藥物和病毒作用后細胞的形態(tài)學變化,通過MTT法測定各組細胞的存活率,并用流式細胞儀通過Amqexin V/PI雙染法檢測各組細胞的凋亡百分比,用Western blot方法檢測各組細胞中凋亡相關蛋白Caspase-3、6、7、9和NF-κB的表達. 結果:用倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài),結果發(fā)
3、現VSV對照組細胞出現了明顯的病毒感染的表現,而用藥物處理組,細胞的狀態(tài)出現了明顯的好轉;通過MTT檢測可以看出,不同濃度的大蒜素和金銀花能夠在不同程度上提高VSV誘導的THP-1、MT-2和WISH細胞的存活率,且結果具有統(tǒng)計學意義;采用AnIlexin V/PI雙染法通過流式細胞計數儀檢測各組細胞的凋亡率,從結果可以看出,VSV能夠引起THP-1、MT-2和WISH細胞凋亡百分比顯著上升,而大蒜素和金銀花可在不同程度上降低VSV誘導
4、的THP-1、MT-2和WISH細胞的凋亡百分比,其中尤以兩種藥物的高濃度組作用最為顯著,呈現出明顯的劑量依賴關系;采用Western blot方法檢測各組細胞的凋亡相關蛋白的表達情況,結果表明,VSV可以激活Caspase-3、6、7、9和NF-кB蛋白的大量表達,大蒜素和金銀花可分別在不同程度上降低Caspase-3、6、7、9和NF-кB的蛋白表達,且隨著大蒜素和金銀花濃度的升高,蛋白的表達量表現出逐漸減少的趨勢,其中以兩種藥物的
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