丙泊酚、咪唑安定對(duì)大鼠肢體缺血再灌注后腎肺細(xì)胞凋亡的影響及機(jī)制探討.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)用TUNEL法、電泳法及免疫組織化學(xué)等技術(shù)觀察在體大鼠肢體缺血再灌注后腎臟、肺臟損傷發(fā)生過程中，細(xì)胞凋亡以及Bcl-2、caspase-3蛋白質(zhì)表達(dá)的變化，采血取上清檢測(cè)血肌酐、尿素氮水平，并探討臨床麻醉常用藥物丙泊酚、咪唑安定的干預(yù)效應(yīng)及機(jī)制，為其在臨床應(yīng)用中提供一定的實(shí)驗(yàn)支持。 方法：健康雄性SD大鼠，10％的烏拉坦(1.0g·kg-1)腹腔注射麻醉，隨機(jī)分為6組：①對(duì)照組或假手術(shù)組(sham組，n=6)，只進(jìn)行

2、麻醉并解剖股血管及股神經(jīng)，不做其它處理。②肢體缺血1小時(shí)再灌注4小時(shí)組(I1h組，n=6)。③肢體缺血3小時(shí)再灌注4小時(shí)組(I3h組，n=6)。④肢體缺血3小時(shí)再灌注4小時(shí)+丙泊酚組(Pro組，n=6)。⑤肢體缺血3小時(shí)再灌注4小時(shí)+咪唑安定組(Mizo組，n=6)。⑥肢體缺血3小時(shí)再灌注4小時(shí)+10％的脂肪乳組(Intr組，n=6)。缺血前10分鐘靜脈注射丙泊酚(生理鹽水稀釋至0.5％)5mg·kg-1，然后以10mg·kg-1·h-

3、1持續(xù)輸注至實(shí)驗(yàn)結(jié)束；咪唑安定(生理鹽水稀釋至0.05％)0.5mg·kg-1，然后以0.2mg·kg-1·h-1持續(xù)輸注至實(shí)驗(yàn)結(jié)束；Intr組給予等量的10％的脂肪乳(生理鹽水稀釋至5％)；I1h組和I3h組給予生理鹽水。實(shí)驗(yàn)結(jié)束，頸動(dòng)脈放血處死大鼠，同時(shí)留取血液，離心取上清-20℃冰箱保存測(cè)血肌苷和尿素氮值；分別取肺組織及腎組織采用TUNEL法觀察細(xì)胞凋亡的發(fā)生情況；免疫組織化學(xué)觀察Bcl-2、caspase-3蛋白質(zhì)表達(dá)情況；并提

4、取組織DNA進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳觀察其變化。 結(jié)果：①腎功能即血肌酐，尿素氮結(jié)果：各組測(cè)量結(jié)果均在正常值范圍。②TUNEL結(jié)果：sham組幾乎未見凋亡細(xì)胞。比較凋亡指數(shù)(AI)：其它各組與sham組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；I1h組與I3h組比較差別有顯著性(P＜0.05)；Mizo組與I3h組比較差別有顯著性(P＜0.01)；Pro組與Intr組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；Mizo組凋亡指數(shù)雖比Pro組高，但兩組

5、比較差別無顯著性(P＞0.05)；Intr組與I3h組比較差別無顯著性(P＞0.05)。③組織中Bcl-2、caspase-3的表達(dá)：免疫組織化學(xué)切片以平均光度、陽性單位為指標(biāo)進(jìn)行半定量分析。Bcl-2、caspase-3在對(duì)照組表達(dá)較低，相關(guān)性分析caspase-3表達(dá)陽性單位與AI呈正相關(guān)。Bcl-2表達(dá)平均光度、陽性單位半定量分析：其它組與sham組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；I1h組與I3h組比較差別有顯著性(P＜0.0

6、1)；Mizo組與I3h組比較差別有顯著性(P＜0.01)；Pro組與Intr組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；Mizo組與Pro組兩組比較差別無顯著性(P＞0.01)；Intr組與I3h組比較差別無顯著性(P＞0.05)。caspase-3表達(dá)平均光度、陽性單位半定量分析比較結(jié)果與Bcl-2相同。④組織電泳結(jié)果：sham組腎臟肺臟幾乎未見梯形條帶，I1h組腎臟和I3h組肺臟凋亡發(fā)生較明顯，而其余各組均隱約可見凋亡較典型的條帶，實(shí)驗(yàn)重