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文檔簡介
1、研究目的 觀察肺結核病人外周血單個核細胞Th1/Th2型免疫反應變化以及CpG ODN對Th1/Th2型免疫反應的影響.研究CpG ODN對結核病小鼠Th1/Th2型免疫反應的調節(jié)作用,明確CpG ODN對結核病的預防和免疫治療作用.研究方法第一部分選取20例初發(fā)活動性肺結核病人和20例健康人為研究對象.留取血標本并分離外周血單個細胞(PBMC).分別用RPMI 1640和RPMI 1640+PPD(10μg/ml)培養(yǎng)48小時后,用R
2、T-PCR測定PBMC的FN-γ mRNA和IL-10mRNA表達.同時對PBMC進行CD3/CD8表面抗原染色和胞內抗IFN-γ和IL-4染色,用流式細胞儀檢測T細胞亞群比例.第二部分 20例初發(fā)活動性肺結核病人和20例健康人PBMC各分為4份,分別用RPMI 1640,PPD,CpG ODN,CpG ODN+PPD培養(yǎng)48小時.用real-timePCR檢測PBMC的IFN-γmRNA、IL-10mRNA和IL-12mRNA表達.第
3、三部分 96只雌性BALB/c小鼠隨機分成4組(n=24),分別為CpG ODN預防組(A),對照ODN預防組(B),感染對照組(C)和健康對照組(D).A組和B組小鼠于攻毒前2周分別腹腔注射CpG ODN和對照ODN(30μg/只).隨后A組,B組和C組小鼠尾靜脈內注射結核菌(1×10<'6>/只).于感染后3周每組分別處死小鼠12只,稱取小鼠體重和肺脾濕重.肺和脾置10﹪中性甲醛固定,制作病理切片和抗酸染色.肺組織和脾組織進行結核菌
4、培養(yǎng)和菌落計數(shù).用RT-PCR測定小鼠肺脾組織TLR9(toll-like receptor 9)mRNA表達.real time-PCR 檢測小鼠肺脾組織IFN-γmRNA、IL-10m,IL-4mRNA和IL-6mRNA的表達.每組剩余12只小鼠,觀察60天生存率.第四部分 72只雌性BALB/c小鼠隨機分成3組(n-24),分別為CpG ODN治療組(A),感染對照組(C)和健康對照組(C).A組和B組小鼠尾靜脈內注射結核菌(1×
5、10<'6>/只)制作結核病小鼠模型.A組小鼠于攻毒后1周單次腹腔注射CpG ODN(30μg/只),B組小鼠腹腔注射生理鹽水.于CpG ODN治療后3周每組分別處死小鼠12只,稱取小鼠體重和肺脾濕重.肺和脾置10﹪中性甲醛固定,制作病理切片和抗酸染色.肺組織和脾組織進行結核菌培養(yǎng)和菌落計數(shù).real time-PCR檢測小鼠肺脾組織IFN-γmRNA,IL-12p40mRNA,IL-10mRNA,IL-4mRNA和IL-6mRNA的表
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