土壤中多功能木霉菌的篩選鑒定及木霉多樣性分析.pdf

1、木霉是土壤微生物區(qū)系的重要組成部分，在土壤中增加其含量能夠防治多種植物病害，是應用非常廣泛的生物防治菌。分析土壤中木霉的遺傳以及功能多樣性，能夠為開發(fā)多功能木霉資源，拓展木霉的應用空間，有效地利用木霉防治植物病原菌，提供理論基礎，并可能發(fā)現(xiàn)能夠應用于多功能菌劑開發(fā)的木霉菌株。 本實驗從山東省臨沂、聊城、壽光、章丘四個地區(qū)的西紅柿、黃瓜大棚，韭菜、白菜菜地，大蒜、大蔥種植區(qū)采取的120份土壤樣品中分離獲得木霉244株。 通

2、過對峙培養(yǎng)實驗發(fā)現(xiàn)對棉花棉花立枯絲核菌具有一定拮抗功能的有114株，其中拮抗作用較好的有19株；通過固體培養(yǎng)法檢測解磷、解鉀、固氮能力發(fā)現(xiàn)，244株木霉中有74株具有明顯解磷圈，且發(fā)現(xiàn)拮抗效果較好的19株解磷圈較大，未發(fā)現(xiàn)有明顯解鉀透明圈的菌株，所有菌株在固氮培養(yǎng)基上無生長現(xiàn)象。 對19株拮抗效果較好且解磷圈較大的菌株進行液體培養(yǎng)檢測解磷、解鉀能力，發(fā)現(xiàn)，在液體培養(yǎng)條件下，部分菌株未顯示出解磷能力，菌株T13-8(1.792μg

3、/mL)、T23(1.652μg/mL)顯示出較高的解磷能力；部分菌株在液體培養(yǎng)下顯示出一定的解鉀功能，菌株T47-4(20.585μg/mL)顯示出較高的解鉀能力。通過平板實驗檢測此19個菌株植酸酶活性發(fā)現(xiàn)，能夠水解植酸鈣的有15株，其中包括高效解磷菌株T13-8、T23，高效解鉀菌株T47-4。 對以上19個菌株進行了形態(tài)學和分子生物學鑒定，發(fā)現(xiàn)菌株T8-4、T9-1、T23、T25、T30-5、T31-3、T38-5、T4

4、7-4、T35-1為Trichoderma longibrachiatum；菌株T80-2、T38-6、T13-8、T44-1、T57、T62-2、T34、T17為Trichodermaharzianum；菌株T61-2為Trichoderma virens：菌株T18-1為Trichoderma citrinoviride。依據(jù)ITS序列進行的系統(tǒng)發(fā)育分析結(jié)果支持此19個木霉菌株的鑒定結(jié)果。 研究土壤木霉多樣性時，將來自相同地

5、區(qū)同種蔬菜作物的土樣混合為一份土樣，120份共混成13份混合土壤樣品，設計木霉ITS區(qū)特異保守序列擴增引物，利用PCR-DGGE技術對土壤木霉的多樣性進行了分析。發(fā)現(xiàn)，臨沂地區(qū)木霉多樣性較高，其次為聊城、壽光、章丘；同一地區(qū)，不同蔬菜作物土壤中，木霉種類具有相似性，不同地區(qū)之間也有相似種；木霉多樣性高的地區(qū)土傳病害的發(fā)生相對較少。為了進一步對PCR-DGGE技術用于土壤木霉多樣性分析的可行性提供理論支持，本實驗先后通過DGGE技術對19