解毒活血配伍對ApoE（---）小鼠AS易損斑塊細(xì)胞凋亡相關(guān)基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　觀察基于中醫(yī)“瘀毒”病機(jī)的解毒活血中藥提取物配伍（山楂提取物配伍虎杖提取物）對載脂蛋白E基因敲除[ApoE（-/-）]小鼠血脂及動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)易損斑塊的病理形態(tài)學(xué)影響，探討解毒活血中藥提取物配伍對ApoE（-/-）小鼠主動脈中細(xì)胞凋亡調(diào)控因子B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2相關(guān)X蛋白（Bcl-2 Associated X protein，Bax）、B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2(B-cellle

2、ukemia-2，Bcl-2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-9(cysteinyl aspartatespecific proteinase，Caspase-9)的干預(yù)作用，為解毒活血中藥配伍應(yīng)用于臨床防治AS提供實驗數(shù)據(jù)。
　　方法：
　　選取8周齡雄性ApoE（-/-）小鼠64只，高脂膳食13周后，隨機(jī)取4只，處死后取主動脈，證實易損斑塊形成，其余小鼠隨機(jī)分為模型組、辛伐他汀組、解毒活血配伍（山楂提取物+虎杖提取物）高劑

3、量組、中劑量組、低劑量組，每組12只。并以8周齡相同遺傳背景的雄性C57BL/6J鼠12只，給予普通飼料，作為空白對照組。各組灌胃給藥，每日一次，連續(xù)給藥13周。模型組和空白對照組予以等體積蒸餾水灌胃，解毒活血配伍低、中、高劑量組分別按照:虎杖提取物40mg/kg+山楂提取物86.7mg/kg、虎杖提取物80mg/kg+山楂提取物173.4mg/kg、虎杖提取物160mg/kg+山楂提取物346.8mg/kg灌胃給藥，其中山楂提取物含山

4、楂總黃酮30％，虎杖提取物含虎杖苷98％。辛伐他汀組每日予辛伐他汀2.6mg/kg灌胃。給藥期間除空白對照組予以普通飼料，其余各組均給予SPF級高脂飼料。給藥結(jié)束后眼球取血測定小鼠血脂，HE染色觀察小鼠主動脈病理形態(tài)的變化，RT-PCR法檢測小鼠主動脈中凋亡相關(guān)基因Bcl-2、Bax、Caspase-9的mRNA表達(dá)，免疫組化法檢測小鼠主動脈易損斑塊凋亡相關(guān)基因Bcl-2、Bax、Caspase-9的蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：

5、　　血脂檢測結(jié)果顯示:與C57對照組比較，模型組血清總膽固醇(totalcholesterol，TC)、甘油三酯(triglyceride，TG)、低密度脂蛋白膽固醇(lowdensity lipoprotein，LDL)、高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein，HDL)均有不同程度的升高，其中TC、LDL顯著升高(P＜0.01);灌胃給藥13周后，與模型組比較，各用藥組血清TC、TG、LDL-C均有不同程

6、度的降低，其中辛伐他汀組LDL-C顯著降低（P＜0.05）;解毒活血高劑量組LDL-C、TC、TG均顯著降低（P＜0.01或P＜0.05）;解毒活血中劑量組HDL-C顯著升高（P＜0.05）;解毒活血低劑量組LDL-C顯著降低（P＜0.05），HDL-C顯著升高（P＜0.01）。各給藥組之間相比，解毒活血高劑量組降低TG、LDL-C、TC的作用最為明顯(P＜0.01或P＜0.05);各給藥組升高HDL-C的作用無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05

7、）。
　　ApoE（-/-）小鼠主動脈病理形態(tài)顯示:C57對照組升主動脈壁薄且結(jié)構(gòu)完整、規(guī)則、各層分界清楚，內(nèi)膜表面未見泡沫細(xì)胞及斑塊，中膜、外膜形態(tài)規(guī)則，內(nèi)外彈力膜清晰可見，血管壁均勻，不增厚;模型組小鼠主動脈壁增厚，內(nèi)膜可見大面積增厚、向管腔內(nèi)隆起，內(nèi)皮細(xì)胞有脫落，大片粥樣斑塊形成，斑塊內(nèi)可見大量泡沫細(xì)胞，中央可見大片粥樣壞死區(qū)及鈣化區(qū)，中膜平滑肌細(xì)胞增生、排列紊亂;灌胃給藥13周后，各給藥組光鏡下病理改變類似模型組，但病變程

8、度較模型組具有不同程度減輕，其中解毒活血高劑量組，粥樣斑塊面積明顯減少，斑塊內(nèi)見多量泡沫細(xì)胞，未見鈣化;解毒活血中劑量組，粥樣斑塊面積明顯減少，斑塊內(nèi)見少量粥樣壞死區(qū)及鈣化區(qū);解毒活血低劑量組，粥樣斑塊面積輕度減少，斑塊內(nèi)見中等量粥樣壞死區(qū)及膽固醇結(jié)晶裂隙;辛伐他汀組，粥樣斑塊面積明顯減少，斑塊內(nèi)見中等量粥樣壞死區(qū)，泡沫細(xì)胞多見。
　　RT-PCR結(jié)果顯示:與C57對照組比較，模型組主動脈Bax、Caspase-9 mRNA表達(dá)均

9、顯著升高(P＜0.01)，Bcl-2 mRNA表達(dá)降低無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）;灌胃給藥13周后，與模型組比較，辛伐他汀組和解毒活血高劑量組均能降低主動脈Bax mRNA表達(dá)（P＜0.01或P＜0.05），且辛伐他汀組降低最顯著;解毒活血高劑量組及辛伐他汀組主動脈CAS-9 mRNA表達(dá)均顯著降低(P＜0.01或P＜0.05);解毒活血高、中劑量組顯著升高Bcl-2 mRNA表達(dá)水平（P＜0.05）。
　　免疫組化結(jié)果顯示:與

10、C57對照組比較，模型組主動脈易損斑塊內(nèi)Bax、Caspase-9蛋白表達(dá)均顯著升高(P＜0.01)，Bcl-2蛋白顯著降低（P＜0.05）;灌胃給藥13周后，與模型組比較，解毒活血高、中劑量組及辛伐他汀組主動脈易損斑塊Bax蛋白表達(dá)均顯著降低（P＜0.01或P＜0.05）;解毒活血中劑量組、辛伐他汀組主動脈易損斑塊Caspase-9蛋白表達(dá)均顯著降低(P＜0.01);辛伐他汀組、解毒活血高、中劑量組主動脈易損斑塊Bcl-2蛋白表達(dá)水平

11、均顯著升高（P＜0.01或P＜0.05）。各給藥組之間比較，解毒活血高劑量組Bax表達(dá)顯著降低，差異具有顯著性（P＜0.01）;解毒活血高劑量組Bcl-2蛋白表達(dá)升高最顯著(P＜0.01)。
　　結(jié)論：
　　解毒活血中藥提取物配伍能明顯改善ApoE（-/-）小鼠的血脂水平，保護(hù)血管內(nèi)皮，減輕AS病變，其可能的機(jī)制為通過下調(diào)促凋亡因子Bax、Caspase-9表達(dá)，上調(diào)抗凋亡因子Bcl-2表達(dá)抑制血管細(xì)胞凋亡，從而延緩AS進(jìn)展