自體骨膜細胞-藻酸鈣凝膠載體復合體修復骨缺損的定量分析研究.pdf

1、目的：由于腫瘤、炎癥、外傷和發(fā)育異常等導致的骨缺損在臨床上極為常見，骨缺損自身修復能力較低，只能修復有限大小的骨缺損，自體、異體骨移植作為修復骨缺損最常用的方法，存在著諸多不足：來源有限、供區(qū)結(jié)構(gòu)破壞、功能受影響、具有免疫原性、傳染疾病等，目前開發(fā)的骨替代材料距理想的目標還有很大距離。骨缺損的治療一直是骨科領域不斷深入研究的課題。組織工程學的發(fā)展為這一難題提供了新的思路和方法。骨組織工程學的研究內(nèi)容主要包括：種子細胞、可降解的生物材料、

2、骨生長相關因子。藻酸鈣凝膠是一種理想的組織工程支架材料，藻酸鈣凝膠在電鏡下掃描為三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，其作為細胞載體具有以下特點：良好的力學性能、化學穩(wěn)定性、低毒性、低致熱源性、低免疫反應性、確定的空隙率和空隙間距、與細胞有良好的相容性并且操作可一步完成，同時，它能為細胞生長建立良好的三維空間結(jié)構(gòu)，有利于氧和營養(yǎng)物質(zhì)進行交換并排出廢物，從而具有良好的骨傳導作用。骨膜含有成骨細胞、骨原細胞及成纖維細胞等，大量實驗證明骨膜來源的成骨細胞成骨能力強，

3、是較好的種子細胞提供物。骨膜中及骨損傷局部分泌豐富的轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-β)和骨形態(tài)生發(fā)蛋白(BMP)，具有刺激骨膜細胞分化和骨膜成骨的作用。藻酸鈣凝膠與自體骨膜細胞如何配比才能達到最佳骨骼生長狀態(tài)，是實驗過程中亟待解決的難題。本實驗在總結(jié)前人研究經(jīng)驗的基礎上，進一步觀察自體骨膜細胞—藻酸鈣凝膠復合體在動物機體中的成骨情況，并初步探討藻酸鈣凝膠與骨膜細胞的最佳配比。 方法：健康成年新西蘭白兔96只，隨機分成六組，即A、B、C、

4、D、E、F組(其中A、B、C、D、E組為試驗組，F(xiàn)組為對照組)，每組16只。手術(shù)造成雙側(cè)橈骨15mm標準骨缺損模型，將取下的雙側(cè)橈骨骨膜銳性剝離后剪成碎片，混入5ml的1640液中，用細胞懸液制備器將混合液制成細胞懸液，800轉(zhuǎn)/分鐘離心8分鐘濃集細胞，將A、B、C、D、E組沉淀的細胞分別與藻酸鈉溶液充分混勻，體積約為0.4ml(約等于骨缺損體積)，置于模型中，調(diào)節(jié)A、B、C、D、E組細胞數(shù)為總數(shù)的1、1/4、1/16、1/64、1/2

5、56，滴加葡糖酸鈣使溶液變成凝膠，并植入自體右側(cè)橈骨缺損模型處。于術(shù)后2、4、8、12周每組隨機處死動物4只，將標本仔細去除肌肉后進行大體觀察、X-線檢查、組織學觀察，同時測定血清堿性磷酸酶(ALP)、血清鈣水平。 結(jié)論： 1.自體骨膜細胞懸液—藻酸鈣凝膠復合體在自體內(nèi)成骨作用良好，修復骨缺損效果滿意，且操作簡便，易于臨床掌握和應用。 2.藻酸鈣凝膠具有良好的組織相容性、表面活性、生物降解性和可塑形性，是一種良好