自體骨髓間充質(zhì)干細胞藻酸鈣載體復合物對兔膝關節(jié)軟骨缺損修復影響的實驗研究.pdf

1、目的：軟骨組織多處于人體骨骼的重要部位，其缺損修復一直為臨床急待解決的難題，用組織工程方法修復關節(jié)軟骨缺損是近年來正在研究的新途徑。其中無論是軟骨細胞或干細胞與載體材料制成復合物抑或MSCs經(jīng)體外誘導培養(yǎng)成軟骨后與支架材料制成復合物再植入缺損<'[1,2]>，幾乎均著重體外培養(yǎng)條件的研究，而忽略了對于改善局部微環(huán)境的探討。為此，本實驗試圖在載體復合物植入軟骨缺損微環(huán)境內(nèi)時，增加能促進MSCs分裂、增殖、分化及血管新生的bFGF及參與并促

2、進成軟骨細胞合成軟骨基質(zhì)及纖維的維生素C等，從而達到提高軟骨缺損修復療效的目的。 實驗方法: 從24只3月齡新西蘭大耳白兔髂骨處抽取骨髓，以密度梯度離心法分離出骨髓間充質(zhì)干細胞(MSCs)作為種子細胞進行擴增培養(yǎng)至第三代，制成細胞懸液，而后在自制模具中與藻酸鈣制備成與兔膝關節(jié)軟骨全層缺損(直徑4mm、深度4mm)相一致的載體復合物同時加入bFGF和維生素C，將該載體復合物植入兔左膝關節(jié)軟骨全層缺損處作為A組，而右膝關節(jié)的

3、關節(jié)軟骨全層缺損處則植入MSCs與藻酸鈣的載體復合物作為B組。另取兔6只，左膝按上述方法作一缺損植入單純藻酸鈣載體作為C組；右膝缺損則作空白對照D組。待術后不同時間點(30天、60天及90天)取材，常規(guī)石蠟包埋后制成切片，分別用于HE、Masson、番紅O、透射電鏡、免疫組化等指標以觀察軟骨缺損修復效果。 實驗結(jié)果: A、B、C三組軟骨缺損均被透明軟骨和纖維組織充填，只是A組的透明軟骨組織較B組多，C組最少。隨植入時間后

4、移，A組幾乎均被透明軟骨樣組織填平并且充填組織與周邊正常關節(jié)軟骨的交界逐漸分辨不出，并與深層軟骨下骨相連接，軟骨細胞間質(zhì)的膠原纖維從表層向深層呈放射狀排列于軟骨細胞基質(zhì)中。而B組的缺損處表面尚有較多的纖維組織且充填組織與周邊正常關節(jié)軟骨的分界較A組清晰，C組缺損處表面可見有較多纖維組織和未降解的藻酸鈣，與周邊正常關節(jié)軟骨分界較A、B組清晰。A組填充的軟骨細胞具有明顯陷窩的，互相距離較遠的3-5個細胞排列呈柱狀的成熟軟骨細胞明顯較B組多，