兔骨髓基質(zhì)干細胞誘導(dǎo)分化修復(fù)膝關(guān)節(jié)軟骨缺損.pdf

1、　　研究目的：運用組織工程學(xué)技術(shù)進行骨髓基質(zhì)干細胞(BMSCs)的提取、培養(yǎng)擴增、誘導(dǎo)分化、關(guān)節(jié)軟骨缺損內(nèi)植入,初步探索BMSCs在軟骨修復(fù)中的作用機制及可行性。
　　研究方法：穿刺抽取2月齡新西蘭白兔骨髓,采用密度梯度離心+貼壁培養(yǎng)法分離、純化和擴增BMSCs,檢測第三代BMSCs生長曲線和貼壁率。以轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)、維生素C和地塞米松為誘導(dǎo)因子,對BMSCs進行平面和立體軟骨方向誘導(dǎo),利用Ⅱ型膠原免疫組化和甲苯

2、胺藍異染性進行檢測。同時檢測TGF-β1和IGF-1在聯(lián)合誘導(dǎo)過程中的作用。取平面誘導(dǎo)4天的BMSCs以2×107細胞濃度與海藻酸鈉混合,經(jīng)Ca2+作用形成凝膠珠,隨機分為2組,分別應(yīng)用TGF-β1誘導(dǎo)液和TGF-β1和IGF-1誘導(dǎo)液培養(yǎng)6天。相同方法制作不含細胞的空白凝膠和含未誘導(dǎo)的BMSCs的凝膠復(fù)合體,完成植入物準備。于20只兔雙側(cè)膝關(guān)節(jié)股骨內(nèi)側(cè)髁負重面制作3.5mm×8.0mm×3.0mm的軟骨缺損模型,分為4組,每組10個膝

3、,分別為空白凝膠組、未誘導(dǎo)組、TGF-β1誘導(dǎo)組和TGF-β1和IGF-1聯(lián)合作用組,分別植入相應(yīng)的細胞凝膠復(fù)合體。手術(shù)后于2、4、8、12、20周進行取材,然后進行相應(yīng)的組織學(xué)分析。
　　研究結(jié)果：應(yīng)用密度梯度離心法+貼壁培養(yǎng)法可以分離、純化、擴增兔BMSCs。在TGF-β1、地塞米松和維生素C的聯(lián)合誘導(dǎo)下,兔BMSCs可以向軟骨細胞表型轉(zhuǎn)化。TGF-β1和IGF-1聯(lián)合作用下可以促進BMSCs增殖,細胞基質(zhì)分泌增多。BMSCs