兔骨髓基質干細胞誘導分化修復膝關節(jié)軟骨缺損.pdf

1、　　研究目的：運用組織工程學技術進行骨髓基質干細胞(BMSCs)的提取、培養(yǎng)擴增、誘導分化、關節(jié)軟骨缺損內植入,初步探索BMSCs在軟骨修復中的作用機制及可行性。
　　研究方法：穿刺抽取2月齡新西蘭白兔骨髓,采用密度梯度離心+貼壁培養(yǎng)法分離、純化和擴增BMSCs,檢測第三代BMSCs生長曲線和貼壁率。以轉化生長因子β1(TGF-β1)、維生素C和地塞米松為誘導因子,對BMSCs進行平面和立體軟骨方向誘導,利用Ⅱ型膠原免疫組化和甲苯

2、胺藍異染性進行檢測。同時檢測TGF-β1和IGF-1在聯合誘導過程中的作用。取平面誘導4天的BMSCs以2×107細胞濃度與海藻酸鈉混合,經Ca2+作用形成凝膠珠,隨機分為2組,分別應用TGF-β1誘導液和TGF-β1和IGF-1誘導液培養(yǎng)6天。相同方法制作不含細胞的空白凝膠和含未誘導的BMSCs的凝膠復合體,完成植入物準備。于20只兔雙側膝關節(jié)股骨內側髁負重面制作3.5mm×8.0mm×3.0mm的軟骨缺損模型,分為4組,每組10個膝

3、,分別為空白凝膠組、未誘導組、TGF-β1誘導組和TGF-β1和IGF-1聯合作用組,分別植入相應的細胞凝膠復合體。手術后于2、4、8、12、20周進行取材,然后進行相應的組織學分析。
　　研究結果：應用密度梯度離心法+貼壁培養(yǎng)法可以分離、純化、擴增兔BMSCs。在TGF-β1、地塞米松和維生素C的聯合誘導下,兔BMSCs可以向軟骨細胞表型轉化。TGF-β1和IGF-1聯合作用下可以促進BMSCs增殖,細胞基質分泌增多。BMSCs