骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合關(guān)節(jié)軟骨脫細(xì)胞基質(zhì)修復(fù)兔軟骨全層缺損的實驗研究.pdf

1、目的：1 探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells。BMSCs)的分離、培養(yǎng)和鑒定。2探討關(guān)節(jié)軟骨脫細(xì)胞基質(zhì)支架材料的改良制備方法。3研究BMSCs復(fù)合關(guān)節(jié)軟骨脫細(xì)胞基質(zhì)修復(fù)兔全層關(guān)節(jié)軟骨缺損，對修復(fù)組織進(jìn)行評價，評價修復(fù)效果，為臨床應(yīng)用軟骨組織工程學(xué)方法修復(fù)軟骨缺損提供實驗基礎(chǔ)和理論依據(jù)。 方法：1 實驗動物選用健康的青紫藍(lán)兔24只，3～4月齡，體重2.5—3.

2、5kg，應(yīng)用貼壁培養(yǎng)篩選法結(jié)合密度梯度離心法進(jìn)行分離BMSCs，并行體外擴(kuò)增培養(yǎng)。用BMSCs特異性標(biāo)記抗體和造血細(xì)胞特異性標(biāo)記抗體對分離擴(kuò)增的細(xì)胞進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)方法鑒定。2以 Cotlrtman 等提出的四步法為基礎(chǔ)的改良法制備關(guān)節(jié)軟骨脫細(xì)胞基質(zhì)，行組織學(xué)觀察和掃描電鏡觀察。3 DMEM中加入轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-β)、地塞米松、維生素C，將第二代BMSCs懸液，DMEM培養(yǎng)液加入裝有適量關(guān)節(jié)軟骨脫細(xì)胞支架材料的培養(yǎng)瓶中，體外培養(yǎng)

3、3 天，將復(fù)合物移植于兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損處。按照完全隨機(jī)的原則分三組，BMSC和關(guān)節(jié)軟骨脫細(xì)胞基質(zhì)復(fù)合體實驗組、關(guān)節(jié)軟骨脫細(xì)胞基質(zhì)對照和空白對照組。實驗組股骨髁間軟骨缺損處(4×3mm)植入BMSC和關(guān)節(jié)軟骨脫細(xì)胞基質(zhì)復(fù)合物，對照組單純植入關(guān)節(jié)軟骨脫細(xì)胞基質(zhì)，空白對照組不作任何植入，分別于術(shù)后8周和16周各處死4只動物，對修復(fù)組織行大體、組織學(xué)及免疫組化染色觀察，參照Sellers的關(guān)節(jié)軟骨組織學(xué)評分標(biāo)準(zhǔn)對修復(fù)組織進(jìn)行評分，數(shù)據(jù)輸入sPS

4、S 10.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，比較各組的評分差異是否具有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果：1 本實驗分離培養(yǎng)的BMSCs形態(tài)學(xué)特征明顯，免疫細(xì)胞化學(xué)方法鑒定結(jié)果為CD44陽性表達(dá)，CD34陰性表達(dá)。2關(guān)節(jié)軟骨脫細(xì)胞基質(zhì)表面粗糙不平，有彈性，掃描電鏡下顯示軟骨陷窩呈蜂窩狀，具有多孔性，未見到殘余的細(xì)胞核、細(xì)胞器。3術(shù)后16周BMSC和關(guān)節(jié)軟骨脫細(xì)胞基質(zhì)實驗組修復(fù)組織呈透明軟骨樣，表面光滑平坦，與周圍軟骨及軟骨下骨整合良好，而DBM組和空白對照組

5、為纖維性修復(fù)和無修復(fù)。修復(fù)組織大體組織學(xué)評分評分結(jié)果，BMSC和關(guān)節(jié)軟骨脫細(xì)胞基質(zhì)實驗組明顯優(yōu)于DBM對照組和空白對照組(P<0.05)，具有顯著性差異。 結(jié)論：1 本實驗分離培養(yǎng)所得的BMSCs是可以作為軟骨組織工程的種子細(xì)胞。2以改良法制備的關(guān)節(jié)軟骨脫細(xì)胞基質(zhì)具有多孔性，除去了細(xì)胞核、細(xì)胞器，可以作為軟骨組織工程較為理想的支架材料。3應(yīng)用軟骨組織工程學(xué)的原理，BMSCs復(fù)合關(guān)節(jié)軟骨脫細(xì)胞支架材料修復(fù)全層關(guān)節(jié)軟骨缺損是一種可行