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1、研究中藥代替抗生素用于動(dòng)物疾病的防控是目前畜牧行業(yè)的一個(gè)熱點(diǎn),但目前中獸藥應(yīng)用存在以下一些問(wèn)題:①中藥的應(yīng)用主要直接用中藥原料粉碎制成以粉散劑為主,藥物的有效成分在動(dòng)物體內(nèi)利用度很低,藥效發(fā)揮慢;②市場(chǎng)上中藥產(chǎn)品大多是中藥粉碎后按組方配成的粗制品,其特點(diǎn)之一是用量大,通常在飼料中占1-3%,有的甚至高達(dá)5-10%;③方劑以古方為主,不能適應(yīng)新的養(yǎng)殖業(yè)需求;④中藥原料有效成分隨產(chǎn)地、采藥季節(jié)、采摘次數(shù)不同而不同,適成效果極不穩(wěn)定,沒(méi)有明確
2、的可控指標(biāo),生產(chǎn)廠家難以控制質(zhì)量,用戶難以檢測(cè)產(chǎn)品質(zhì)量;⑤而且部分廠家打著中藥的旗號(hào)賣抗生素和化學(xué)藥物,很容易引起藥物中毒和動(dòng)物機(jī)體免疫功能紊亂,而且?guī)?lái)藥物殘留等危害。
無(wú)錫正大畜禽有限公司擬將來(lái)源于民間秘方的黃芩解毒散開(kāi)發(fā)成提取物散劑,本研究對(duì)該方的提取工藝、體外抑菌作用和防治雞大腸桿菌病的效果進(jìn)行了系統(tǒng)觀察。本研究的目的,旨在建立該方的生產(chǎn)工藝,驗(yàn)證其藥理和藥效,為申報(bào)新獸藥注冊(cè)提供試驗(yàn)數(shù)據(jù)。研究分為以下四個(gè)部分。
3、> 試驗(yàn)Ⅰ、生產(chǎn)工藝研究本試驗(yàn)通過(guò)生產(chǎn)工藝的研究確立,將組方中有效成分提取,達(dá)到方便臨床給藥,提高藥物的吸收利用率,增加效果、節(jié)約成本。黃芩解毒散方中君臣藥所含的主要活性成分為黃芩苷、槲皮素及齊墩果酸,它們對(duì)常見(jiàn)的胃腸道疾病的致病菌有很強(qiáng)的抑殺作用,因此被確定為方中的有效組分,又考慮到黃芩苷的活性作用明顯,在黃芩中的含量高達(dá)9%以上,性質(zhì)又比較穩(wěn)定,所以黃芩苷被定為活性成分中的指標(biāo)成分。以黃芩苷的提取率為提取工藝的考察指標(biāo),通過(guò)正交試
4、驗(yàn)篩選制定提取方法。結(jié)果表明溫浸法、滲漉法、回流法三種提取方法以回流法的提取率最高,與其他二法有極顯著差異,所以采用回流法提取。正交試驗(yàn)中4個(gè)因素中只有B因素(乙醇體積)為顯著因素,其K值的K2為最大(1.763),所以應(yīng)該取10倍量乙醇。A因素P>0.05,其K值以K2為最大,故其乙醇濃度為50%,C因素中K1與K3接近,故取K3即2次,D因素K1、K2與K3數(shù)值相差較大,故取其2h(第1次)及1h(第2次)。最終確立的最佳的提取工藝
5、條件為加10倍量50%乙醇回流2h,第1次6倍量回流2h,第2次4倍量回流1h。3批中試質(zhì)量符合要求,黃芩苷的轉(zhuǎn)移率達(dá)72%。
試驗(yàn)Ⅱ、黃芩解毒散的抑菌試驗(yàn)本試驗(yàn)測(cè)定了黃芩解毒散分別對(duì)O2、O18和O78型大腸桿菌的抑菌圈及最小抑菌濃度。結(jié)果顯示,黃芩解毒散劑對(duì)O2型大腸桿菌的抑菌圈直徑為13.3±2.5mm,對(duì)O18型大腸桿菌的抑菌圈直徑為7.7±0.6mm,對(duì)O78型大腸桿菌的抑菌圈直徑分別為10.7±0.6 mm,均屬中
6、度敏感。通過(guò)試管二倍稀釋法測(cè)得黃芩解毒散劑藥液對(duì)O2型大腸桿菌的最小抑菌濃度(MIC)為160 mg/mL,對(duì)O18、O78型大腸桿菌的最小抑菌濃度(MIC)均為80 mg/mL,說(shuō)明黃芩解毒散劑對(duì)O2、O18、O78型大腸桿菌有明顯的抑菌效果。
試驗(yàn)Ⅲ、黃芩解毒散治療雞大腸桿菌病試驗(yàn)50日齡羅曼蛋公雞350只,隨機(jī)均分為7組,空白對(duì)照組隔離飼養(yǎng)不做任何處理,其余6組接種雞大腸桿菌后給予不同處理,3個(gè)藥物試驗(yàn)組分別在飼料中添加
7、0.1%、0.05%、0.025%的黃芩解毒散,藥物對(duì)照組在飼料中添加0.02%的氟苯尼考,連續(xù)5天;陽(yáng)性對(duì)照組不添加任何藥物。每天觀察各組雞的臨床癥狀,記錄死亡、下痢、精神沉郁羽數(shù)和生長(zhǎng)情況,至攻毒后10天統(tǒng)計(jì)療效。結(jié)果顯示,黃芩解毒散高、中劑量組的死亡率顯著低于、總有效率顯著高于其余各組,平均體重和增重顯著高于其余各組,下痢和精神沉郁的總羽數(shù)明顯低于其余各組。結(jié)果表明,黃芩解毒散對(duì)大腸桿菌有較好的治療效果,鑒于高、中劑量組多無(wú)顯著差
8、異,推薦中劑量為臨床應(yīng)用劑量,即按0.05%混飼,連用5天。
試驗(yàn)Ⅳ、黃芩解毒散預(yù)防雞大腸桿菌病試驗(yàn)45日齡羅曼蛋公雞350只,隨機(jī)均分為7組,空白對(duì)照組隔離飼養(yǎng)不做任何處理。3個(gè)藥物試驗(yàn)組分別在飼料中添加0.05%、0.025%、0.0125%的黃芩解毒散,藥物對(duì)照組在飼料中添加0.01%的氟苯尼考,陽(yáng)性對(duì)照組不添加任何藥物。各組連續(xù)處理5天后接種雞大腸桿菌,每天觀察各組雞的臨床癥狀,記錄死亡、下痢、精神及生長(zhǎng)情況,連續(xù)觀察
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