H98遺傳毒性及生殖毒性實驗研究.pdf

1、目的:該文在已有的致突變研究資料的基礎(chǔ)上,選用了中國新藥(西藥)臨床前毒理學(xué)評價指導(dǎo)原則未要求,但近年來國外較多開展的姐妹染色單體交換(SCE)、胞質(zhì)分裂阻滯法微核試驗以及hprt基因位點突變分析等遺傳毒性試驗方法,對受試物的致突變性進(jìn)行進(jìn)一步研究.在致突變研究的同時還應(yīng)用生殖毒性(I段)實驗方法評價雌性和雄性動物生殖細(xì)胞接觸H98后對受孕能力、生殖系統(tǒng)及子代的影響.方法:1.遺傳毒性實驗方法:姐妹染色單體交換、胞質(zhì)分裂阻滯法微核試驗及

2、hprt基因位點突變研究均采用CHL細(xì)胞體外培養(yǎng)實驗.CHL細(xì)胞按2×10<'5>/ml的濃度接種于培養(yǎng)瓶中,在CO<,2>恒溫箱中培養(yǎng)18h后加入不同濃度的受試物,常規(guī)收獲.姐妹染色單體交換實驗中加入Brdu對染色單體進(jìn)行標(biāo)記,每個劑量組選擇20~25個第二周期分裂相細(xì)胞光學(xué)顯微鏡下計數(shù)SCE頻率;胞質(zhì)分裂阻滯法微核試驗中加松胞素抑制胞質(zhì)分裂呈現(xiàn)雙核細(xì)胞,每個劑量組計數(shù)3000個雙核細(xì)胞,計算其微核率(‰);hprt基因位點突變分析中

3、含6-TG的樣本1000個細(xì)胞中的突變細(xì)胞(雙核或多核細(xì)胞)數(shù)除以不含6-TG的樣本1000個細(xì)胞中的突變細(xì)胞數(shù),得出hprt基因位點突變頻率(10<'-3>).2.生殖毒性實驗方法:將25~35g雄性小鼠按體重隨機(jī)分為4組,每組20只,按12.5、50.0及200.0mg/kg經(jīng)口給予H98連續(xù)9w,對照組給等容積的0.2％羧甲基纖維素鈉溶液;比較各劑量組小鼠生育率及生殖器官的檢查結(jié)果.雌性小鼠體重28~35g,隨機(jī)分4組,每組35只

4、,于合籠前2w給藥,給藥劑量及給藥途徑與雄性小鼠相同,分別至妊娠第14d及妊娠第18d解剖,比較各劑量組小鼠妊娠率、植入數(shù)、吸收胎數(shù)、活胎數(shù)、植入前(后)丟失率以及各組胎鼠畸形觀察結(jié)果.結(jié)論:1.H98各劑量組SCE頻率未見明顯增高,亦未見藥物影響的劑量效應(yīng)關(guān)系;2.H98各劑量組雙核細(xì)胞微核率(‰)未見明顯增高,hprt突變分析結(jié)果陰性;3.H98作用于小鼠生殖細(xì)胞后,對受胎能力、生殖系統(tǒng)無明顯影響,僅200.0mg/kg組造成死胎數(shù)