谷氨酸受體在人破牙細胞中的表達及對細胞活性的影響.pdf

1、目的：本研究擬建立體外分離培養(yǎng)人乳牙破牙細胞(odontoclast，OD)的方法，檢測谷氨酸受體(glutamate receptors)NR1、NR2B及GluR1在破牙細胞中的表達和分布；觀察NMDA受體拮抗劑革西平馬來酸鹽(MK801)對破牙細胞內Ca2+濃度變化及硬組織吸收活性的影響。 方法：①收集兒童滯留乳牙，分別采用機械分離法、酶消化法及機械加酶消化法行破牙細胞分離培養(yǎng)。倒置顯微鏡、蘇木素—伊紅(Hematoxyl

2、in and Eosin，HE)染色觀察細胞形態(tài)學特征，抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate—resistant acid phosphatase，TRAP)染色鑒定破牙細胞，掃描電鏡(scanning electron microscopy，SEM)觀察破牙細胞吸收陷窩。②免疫細胞化學技術，檢測谷氨酸受體NR1、NR2B及GluR1在人乳牙破牙細胞的分布及表達情況。③Fluo—3 AM熒光探針標記細胞內Ca2+，激光掃描共聚焦顯微鏡(

3、laser scanning confocal microscopy，LSCM)動態(tài)檢測不同條件下破牙細胞內Ca2+濃度水平變化。④異硫氰酸熒光素—鬼筆環(huán)肽(Phalloidin—FITC)標記破牙細胞骨架，觀察MK801對破牙細胞肌動蛋白環(huán)(F—actin ring)形成的影響。 結果：①與單純機械分離或酶消化法相比，機械加酶消化法可獲得較多破牙細胞。②倒置顯微鏡下，破牙細胞形態(tài)多樣，通過偽足伸縮變化進行細胞遷移；HE染色破牙

4、細胞胞核大而明顯，胞核單個到數十個，核仁明顯，胞漿周圍偽足樣突起：TRAP染色破牙細胞胞漿呈酒紅色，胞核陰性不著色；掃描電鏡觀察到破牙細胞在牙片上形成吸收陷窩。③免疫細胞化學顯示NR1、NR2B及GluR1在破牙細胞胞漿部位出現棕黃色顆粒沉淀，以靠近胞核處著色明顯，胞核不表達。④MK801引起胞外Ca2+內流減少，但不能完全阻斷Ca2+的內流。⑤細胞培養(yǎng)6h，破牙細胞骨架結構清晰，多數破牙細胞形成肌動蛋白環(huán)，MK801能減少破牙細胞肌動