菌核凈的免疫檢測技術研究.pdf

1、菌核凈(Dimethachlon)是一種亞胺類新型高效低毒殺菌劑，對于油菜菌核病、煙草赤腥病、水稻紋枯病等具有良好的防效作用，目前尚缺乏靈敏、快速、經濟的殘留檢測方法。免疫學檢測技術是對農藥及其代謝物的重要的快速分析方法，靈敏度高，特異性強。本論文利用菌核凈多克隆抗體進行了免疫學檢測技術研究，主要研究結果如下： 1．對菌核凈的結構進行修飾，通過三步反應在菌核凈分子上引入-CO(CH<,2>)<,3>COOH活性基團，設計合成了模

2、擬菌核凈特征結構的半抗原菌核凈-2-戊二酸半酯；利用活性酯法(DCC法)對半抗原與載體蛋白進行偶聯，通過紫外掃描法和SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳證明成功合成了人工抗原。 2．以菌核凈半抗原與牛血清蛋白(BSA)的偶聯物作為免疫原免疫新西蘭大白兔，獲得了抗菌核凈的多克隆抗體。制備的抗血清效價達1∶512000，經方陣滴定法和間接非競爭ELISA法確定了包被尿和抗血清的工作濃度：包被原稀釋度為1∶1000(2μg/mL)，血清稀釋度為

3、1∶128000。 3．建立了菌核凈間接競爭ELISA(IC-ELISA)檢測方法，優(yōu)化了檢測條件。對菌核凈的半數抑制濃度(I<,50>)為2.83μg/mL，最低檢測濃度(I<,10>)為0.011μg/mL，線性檢測范圍為0.044-25.00μg/mL?？贵w對甲醇有一定耐受力，待測樣品中甲醇含量不宜超過10％；磷酸鹽緩沖液在近中性條件下，ELISA有較高的檢測靈敏度。對煙葉中的菌核凈進行添加回收試驗，IC-ELISA檢測的