酪胺酶聯(lián)免疫檢測方法的研究.pdf

1、酪胺是生物胺的一種，通過微生物對食品中游離酪氨酸的脫羧基作用形成。由于其含量變化可以客觀地反映肉類腐敗變質(zhì)進(jìn)程，因此它可以作為評價(jià)肉類新鮮度及腐敗品質(zhì)變化的重要指標(biāo)。本文建立了一種具有高特異性的酶聯(lián)免疫方法(ELISA)來檢測食品中的酪胺。
　　采用甲醛法和戊二醛法，將酪胺分別與牛血清白蛋白、卵清蛋白偶聯(lián)，成功制備了酪胺的免疫原與包被原。通過免疫新西蘭大耳白兔得到高效價(jià)的特異性抗血清，使用Protein A Sepharose-4

2、B親和層析法純化抗血清得到酪胺多克隆抗體。本研究建立了間接競爭酶聯(lián)免疫檢測方法，對影響實(shí)驗(yàn)的各因素（包被原包被量，抗體稀釋度，羊抗兔HRP標(biāo)記二抗稀釋度，封閉液等）進(jìn)行了優(yōu)化與篩選，最終確定包被原包被量為0.1μg/孔，抗體稀釋度為1∶500，羊抗兔HRP標(biāo)記二抗的稀釋度為1∶15000，封閉液為0.5％乳粉/PBS溶液，抗體與標(biāo)準(zhǔn)品的孵育溫度為25℃，在此工作條件下所獲得的標(biāo)準(zhǔn)曲線靈敏度最高，穩(wěn)定性最好。本研究所建立方法的靈敏度(IC

3、50)為0.20±0.015 mg/L，檢測限(IC15)為0.02±0.004 mg/L。所制備的抗體具有良好的特異性，與酪氨酸、苯乙胺、組胺、色胺均無交叉反應(yīng)。
　　本研究通過對樣品前處理?xiàng)l件的優(yōu)化，消除了樣品基質(zhì)影響，得到一種簡單可行的樣品處理方法，并將建立的方法應(yīng)用于豬肉、牛肉、魷魚、鱈魚中酪胺的檢測，樣品檢出限是1.20 mg/kg。當(dāng)酪胺標(biāo)準(zhǔn)品的添加濃度為12，24，60 mg/kg時(shí)，所有樣品的回收率在80.71-1