重金屬汞酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法的研究.pdf

1、分類號(hào)：R15密級(jí)：(秘密、機(jī)密、絕密)學(xué)校代碼：10057研究生學(xué)號(hào)：2009813034重金屬汞酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法的研究DevelopmentofEnzyme—linkedImmunoassayfortheDeterminationofMercury專業(yè)名稱：營(yíng)養(yǎng)與食品衛(wèi)生學(xué)指導(dǎo)教師姓名：王俊平教授研究生姓名：方淑兵申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：醫(yī)學(xué)碩士論文提交同期：2012年03月論文課題來(lái)源：國(guó)家項(xiàng)目學(xué)位授予單位：天津科技大學(xué)摘要本實(shí)驗(yàn)建立了重金

2、屬汞離子的間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫(ICELISA)分析方法。由于汞離子不具有免疫原性，因此以異硫氰酸芐基乙二胺四乙酸(ITCBE)為雙功能螯合劑連接汞離子和鑰孔血藍(lán)蛋白(KLH)制備免疫原，在此基礎(chǔ)上免疫新西蘭大A兔獲得特異性抗體，抗體效價(jià)為1：70000。用獲得的抗體建立汞的間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫分析方法。本實(shí)驗(yàn)在優(yōu)化了包被抗原包被量、抗體稀釋倍數(shù)、稀釋液離子強(qiáng)度、稀釋液pH值和封閉液的基礎(chǔ)上，建立了重金屬汞間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA的抑制率標(biāo)準(zhǔn)曲線。建

3、立的IC—ELISA檢測(cè)方法的檢測(cè)限為04599／L，靈敏度為410“∥L。特異性實(shí)驗(yàn)表明，抗體對(duì)鎳和銅有一定的交叉反應(yīng)，交叉反應(yīng)率分別為108％和135％，與其他金屬均無(wú)明顯交叉反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)選取自來(lái)水、海河水、白芷、胡蘿卜和蝦蛄為檢測(cè)樣本，通過(guò)基質(zhì)影響消除實(shí)驗(yàn)確定樣品前處理方法，同時(shí)進(jìn)行添加回收實(shí)驗(yàn)。自來(lái)水和海河水過(guò)022gm水膜后用雙蒸水稀釋即可消除基質(zhì)影響，白芷、胡蘿卜和蝦蛄采用硝酸和高氯酸體積比為5：1的硝化體系進(jìn)行硝化處理，然

4、后用雙蒸水稀釋可以消除基質(zhì)影響。添加回收實(shí)驗(yàn)表明，自來(lái)水、海河水、白芷、胡蘿卜和蝦蛄中汞的回收率均在70％～120％，變異系數(shù)在20％以內(nèi)。使用電感耦合等離子體質(zhì)譜(ICPMS)法驗(yàn)證方法的準(zhǔn)確性，儀器檢測(cè)結(jié)果和建立的ELISA分析方法具有很好的相關(guān)性(白芷樣品檢測(cè)判定系數(shù)為0988)，表明建立的方法具有很好的準(zhǔn)確性。本實(shí)驗(yàn)建立的用于檢測(cè)食品和藥品中的重金屬汞殘留的酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法，具有靈敏度高、使用簡(jiǎn)便、不需要昂貴的儀器等優(yōu)點(diǎn)，可以作