離子液體介導(dǎo)的嘔吐毒素酶聯(lián)免疫檢測方法的研究.pdf

1、目前，常規(guī)酶聯(lián)免疫反應(yīng)體系普遍存在靈敏度、穩(wěn)定性、特異性不夠完善等問題，而咪唑類離子液體作為綠色反應(yīng)介質(zhì)可改善和提高酶反應(yīng)的活性、穩(wěn)定性和立體選擇性。本研究以辣根過氧化物酶(HRP)為研究對象，通過篩選結(jié)構(gòu)和性質(zhì)上呈規(guī)律性遞變的對稱性咪唑離子液體，應(yīng)用于辣根過氧化物酶催化反應(yīng)，篩選出能夠促進(jìn)HRP活性的友好型離子液體，將其應(yīng)用于吐毒素酶聯(lián)免疫檢測介質(zhì)體系中，與傳統(tǒng)不含該液體的免疫檢測體系相比，該離子液體的介入能夠提高酶聯(lián)免疫檢測的靈敏度

2、、重現(xiàn)性等特性。主要研究內(nèi)容如下：
　　 ⑴研究了辣根過氧化物酶(HRP)在含有三種離子液體1-正丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸、1-異丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸([i-Bmim]BF4)及1-仲丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸體系中的反應(yīng)特性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，HRP在含適量[i-Bmim]BF4(濃度變化范圍0.0035g/ml～0.017g/ml)體系中的催化活性及穩(wěn)定性高于其他體系；反應(yīng)溫度和pH對含離子液體的反應(yīng)介質(zhì)中酶活力的影響規(guī)律與

3、不含離子液體時的規(guī)律相似。與不含該離子液體的反應(yīng)介質(zhì)相比，HRP在含[i-Bmim]BF4的體系中催化反應(yīng)的最大反應(yīng)速率(Vmax)和米氏常數(shù)(Km)均升高。
　　 ⑵通過EDC法合成DON完全抗原，DON與BSA的初始摩爾比為70:1，得到DON完全抗原中DON與BSA的摩爾比為11.8:1。通過紅外光譜掃描以及ELISA實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了DON-BSA的偶聯(lián)成功。用DON-BSA免疫新西蘭大白兔，得到抗體的最高效價為51200。利用

4、間接競爭免疫方法得到最佳抗原抗體工作濃度分別為1:100和1:6400，進(jìn)一步得到其IC50值為549.5ng/ml。
　　 ⑶將[i-Bmim]BF4離子液體應(yīng)用于DON酶聯(lián)免疫檢測。結(jié)果表明，當(dāng)體系中該離子液體的濃度為0.014g/ml時，其IC50值為331.1ng/ml，比不含該液體時靈敏度提高了約39.7%；測定體系中離子液體濃度為0和0.014g/ml時各孔的的重現(xiàn)性試驗(yàn)，兩者的變異系數(shù)分別為3.99%和1.14%，