喹諾酮類獸藥殘留的酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法的研究與建立.pdf

1、喹諾酮是一類合成抗生素類藥物，英文名稱：quinolones(QNs)。在化學(xué)上與萘啶酮酸相關(guān)，其作用機(jī)理是直接作用于細(xì)菌的核、抑制細(xì)菌的DNA旋轉(zhuǎn)酶，使酶不能在DNA雙鏈上引入切口，破壞細(xì)菌的代謝和繁殖，迅速殺滅細(xì)菌。最初這類藥物用于治療尿道感染，現(xiàn)在已發(fā)展到治療系統(tǒng)感染疾病，并且在動(dòng)物飼養(yǎng)中作為預(yù)防和治療藥物普遍使用。近年來(lái)，這些藥物在動(dòng)物組織中的殘留已引起廣泛的注意。 通過(guò)將諾氟沙星烷基化合成諾氟沙星衍生物，經(jīng)過(guò)紫外、液質(zhì)

2、以及核磁共振檢測(cè)后，采用戊二醛法分別與BSA和OVA偶聯(lián)。再利用活化酯法將五種喹諾酮藥物直接與BSA和OVA偶聯(lián)。經(jīng)紫外鑒定，半抗原與蛋白質(zhì)的偶聯(lián)均成功。分別免疫兔子，制備多克隆抗體，經(jīng)篩選，效價(jià)為102400的諾氟沙星衍生物的抗血清較好。 以此抗血清為基礎(chǔ)，初步建立了基于多克隆抗體的間接ELISA方法，來(lái)檢測(cè)QNs。并通過(guò)改變相關(guān)的物理、化學(xué)影響因素，例如：包括包被溶液、抗體稀釋液、封閉液、競(jìng)爭(zhēng)時(shí)間、抗體與標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積比等，

3、對(duì)ELISA方法進(jìn)行優(yōu)化，進(jìn)而在ELISA條件下獲得更好的結(jié)果。 優(yōu)化后，最終得到標(biāo)準(zhǔn)曲線，檢測(cè)限(IC90)為0.0126ng/mL、半數(shù)抑制量(IC50)為0.54ng/mL和檢測(cè)范圍(IC20～I(xiàn)C50)為0.04467～14ng/mL。此外，還從方法的特異性、準(zhǔn)確性、靈敏度來(lái)評(píng)估了本ELISA方法。回收率分別是63％～95％，變異系數(shù)小于20％。除與5種QNs的交叉反應(yīng)低于5％外，其余13種QNs分別在16％和112％之