米諾地爾多克隆抗體的制備及其酶聯(lián)免疫檢測方法的建立.pdf

1、米諾地爾(minoxidil)系血管擴張藥的一種。由于局部長期使用其可刺激毛發(fā)增生，故美國FDA于1988年批準該藥外用治療男性雄激素性脫發(fā)。米諾地爾雖然僅外用于局部，但仍存在輕度皮炎、眩暈、刺激性過敏，面部和四肢多毛癥等不良反應，使用不慎會刺激和灼傷眼部。因此，我國《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》(2007)明令禁止在化妝品中添加米諾地爾，包括日用洗發(fā)、護發(fā)類化妝品。但一些生產(chǎn)商為片面追求功效、牟取暴利，仍違規(guī)在洗發(fā)護發(fā)類化妝品中添加米諾地爾。

2、r>　　然而，目前國內(nèi)尚無關(guān)于洗發(fā)護發(fā)類化妝品中米諾地爾及其鹽和衍生物的檢測方法與標準。有紫外分光光度法和高效液相色譜法測定洗劑和血漿中的米諾地爾個別文獻，但由于其方法尚不成熟而使得應用受限，米諾地爾快速專屬的檢測方法亟待發(fā)展。酶聯(lián)免疫法(enzyme-linked immunosorbent assy，ELISA)具有檢測迅速、方便、靈敏、特異等特點，近年來，其在藥物殘留領(lǐng)域方面的應用受到關(guān)注。
　　本研究旨在制備出具有良好免疫

3、原性的米諾地爾人工抗原及其多克隆抗體并初步建立米諾地爾的酶聯(lián)免疫檢測方法。由于米諾地爾為小分子物質(zhì)，不具備免疫原性，必須應用蛋白鏈接技術(shù)，將米諾地爾與牛血清白蛋白(bovine serum albumin，BSA)進行偶聯(lián)，制備出人工抗原Minoxidil-BSA，經(jīng)紫外光譜分析法(UV)、SDS-PAGE電泳法對其進行鑒定后，用Minoxidil-BSA免疫BALB/C小鼠，制備多克隆抗體(pAb)，鑒定抗血清的效價;進而系統(tǒng)建立米諾

4、地爾的酶聯(lián)免疫檢測法。
　　實驗數(shù)據(jù)表明: Minoxidil-BSA與BSA的紫外光譜掃描結(jié)果相比，發(fā)生了明顯的改變，Minoxidil-BSA與BSA的電泳條帶相比，也發(fā)生了明顯的改變，表明人工抗原合成成功。用Minoxidil-BSA免疫BALB/C小鼠，其抗血清效價為1∶12800，競爭ELISA法結(jié)果證明抗血清對米諾地爾的敏感性較好，通過方陣滴定法確定的最佳工作濃度為包被原濃度1∶200和抗體稀釋倍數(shù)1∶3200。建立的