克隆酶均相免疫檢測(cè)B型鈉尿肽（BNP）方法的建立及初步應(yīng)用.pdf

1、目的:本研究在2001年開始研究CEDIA的方法學(xué),并于2002年成功構(gòu)建了一對(duì)編碼EA、ED的DNA質(zhì)粒,并通過(guò)GST融合蛋白方式得到了高效表達(dá),相關(guān)文章已發(fā)表于中華微生物免疫學(xué)雜志.B型鈉尿肽(BNP)分子量約3KD,正常人的血漿水平低于100pg/ml,因此我們?cè)O(shè)計(jì)了CEDIA法來(lái)檢測(cè)BNP,期望能成功建立具有獨(dú)立知識(shí)產(chǎn)權(quán)的國(guó)產(chǎn)化試劑,降低BNP檢測(cè)的成本,使BNP的檢測(cè)易于在國(guó)內(nèi)普及.結(jié)論:1.通過(guò)基因工程技術(shù)成功構(gòu)建了GST-

2、BNP的表達(dá)質(zhì)粒GST-BNP-pGEX-4T-2(GST-BNP質(zhì)粒),得到了高效表達(dá).2.制備的人BNP抗原,既具有免疫原性又具有反應(yīng)原性,能很好地解決酶免分析中的基本要素抗原(被檢測(cè)物)和相應(yīng)的抗體制備所需.3.制備的GST-BNP在PBS中-20℃保存時(shí)有很好的穩(wěn)定性,4℃時(shí)48小時(shí)內(nèi)也基本穩(wěn)定,該融合蛋白有可能成為BNP測(cè)定的質(zhì)控物和參考物質(zhì).4.通過(guò)基因工程技術(shù)即在DNA水平把待測(cè)分子BNP的cDNA插入ED的cDNA3'端