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1、本研究通過制備抗金黃色葡萄球菌B型腸毒素(SEB)的特異性抗體,建立了牛奶中SEB污染的酶聯(lián)免疫吸附分析法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)。具體包括以下四個(gè)方面的內(nèi)容: 1.SEB的提取與純化從金黃色葡萄球菌發(fā)酵液中純化金黃色葡萄球菌腸毒素B。發(fā)酵液經(jīng)過超濾濃縮、硫酸胺沉淀、陰離子交換色譜和分子篩色譜,獲得了純度較高的SEB。獲得的毒素蛋白在SDS-PAGE電泳中呈一條條帶。
2、 2.抗SEB抗體的制備以自制的SEB為免疫抗原注射BALB/c小白鼠,從抗體的產(chǎn)生進(jìn)程來看,粗毒素免疫組在注射抗原后的第90天有明顯抗體產(chǎn)生,純毒素和毒素對(duì)照品組在注射抗原后的第60天開始有明顯抗體產(chǎn)生。動(dòng)物產(chǎn)生抗體滴度逐漸上升,并在最后達(dá)到高峰,但粗毒素組滴度不及純毒素組滴度高。間接非競(jìng)爭(zhēng)ELISA測(cè)得其最高效價(jià)為1:100,000。 3.樣品中SEB的ELISA檢測(cè)以自制的抗SEB抗體建立的間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法對(duì)幾個(gè)牛
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