金黃色葡萄球菌腸毒素A和B對(duì)哮喘氣道炎癥的作用研究.pdf

1、背景：支氣管哮喘是一種具有家族遺傳性的、伴有全身免疫功能紊亂的變態(tài)反應(yīng)性疾病。近年來(lái)支氣管哮喘的發(fā)病率持續(xù)升高，并且地區(qū)間發(fā)病率存在巨大差異，這讓人們注意到生活的衛(wèi)生化可能增加支氣管哮喘的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。因此有學(xué)者根據(jù)大量流行病學(xué)調(diào)查資料提出了“衛(wèi)生學(xué)說(shuō)”，即感染、腸道固有菌群的刺激、內(nèi)毒素暴露、傳統(tǒng)的農(nóng)業(yè)生活環(huán)境可以降低發(fā)生支氣管哮喘等變態(tài)反應(yīng)性疾病的風(fēng)險(xiǎn)[1-2]。以上這些聯(lián)合作用與特異性IgE的產(chǎn)生與否無(wú)相關(guān)性，說(shuō)明早期暴露于微生物的感

2、染可以部分地干擾后天哮喘變態(tài)反應(yīng)的發(fā)生。例如：中耳炎或其它幼年時(shí)期的感染可能預(yù)防兒童和青少年發(fā)生變應(yīng)性致敏疾病[3-4]。金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的腸毒素(staphylococcalenterotoxin，SE)是一組有高度生物學(xué)活性的蛋白質(zhì)，在免疫學(xué)中現(xiàn)巳被確認(rèn)是一種典型的超級(jí)抗原(superantigen，SAg)。SAg是一類來(lái)源復(fù)雜的蛋白質(zhì)，其在免疫應(yīng)答中只需極微量(ng水平)的這種抗原，利用一種非常獨(dú)特的機(jī)制刺激大量T細(xì)胞增殖并使

3、之產(chǎn)生細(xì)胞因子和細(xì)胞毒性[5]。目前，采用分子生物學(xué)技術(shù)對(duì)SAg進(jìn)行加工處理，從而去除SAg對(duì)人體的毒害作用，而保留SAg的免疫學(xué)特性，使其廣泛應(yīng)用于對(duì)腫瘤，感染性疾病及其他疾病的防治研究中，為免疫系統(tǒng)疾病的治療開辟了新的道路[6-7]。 目的：本課題通過(guò)探討SE對(duì)實(shí)驗(yàn)性哮喘模型中Th1/Th2型細(xì)胞因子和其它炎癥介質(zhì)的調(diào)節(jié)作用，研究SE對(duì)哮喘氣道炎癥的預(yù)防作用，為哮喘的防治提供一種新的免疫防治方法。 方法與內(nèi)容：本研究

4、包括兩個(gè)部分。第一部分：SEB對(duì)豚鼠實(shí)驗(yàn)性哮喘氣道炎癥及Th1/Th2型細(xì)胞因子的影-2-響。 用OVA腹腔注射致敏、霧化激發(fā)方法建立豚鼠變應(yīng)性氣道炎癥模型。實(shí)驗(yàn)組豚鼠在接受OVA致敏之前10天分別給與10ugSEB腹腔注射，隨后觀察其對(duì)OVA致敏激發(fā)所致豚鼠變應(yīng)性氣道炎癥的預(yù)防作用以及對(duì)Th1/Th2型細(xì)胞因子的影響。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法學(xué)及檢測(cè)指標(biāo)主要有：外周血細(xì)胞分類計(jì)數(shù)，支氣管肺泡灌洗液(BALF)細(xì)胞分類計(jì)數(shù)，肺組織病理切片，

5、乩ISA法檢測(cè)血清及BALF中IFN-γ和IL-4濃度。 第二部分：早期注射SEA、SEB對(duì)支氣管哮喘小鼠氣道炎癥及其炎癥介質(zhì)的調(diào)節(jié)作用。 用OVA腹腔注射致敏、霧化激發(fā)方法建立BALB-c小鼠變應(yīng)性氣道炎癥模型。實(shí)驗(yàn)小鼠分別在出生后一周開始每隔一天每只注射0.1mlSEA或SEB(濃度為1ug/ml)，連續(xù)注射7次，對(duì)照組和模型組注射生理鹽水0.1ml/只進(jìn)行對(duì)照，隨后觀察其對(duì)OVA致敏激發(fā)所致BALB-c小鼠變應(yīng)性氣

6、道炎癥的預(yù)防作用以及對(duì)Th1/Th2型細(xì)胞因子的影響。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法學(xué)及檢測(cè)指標(biāo)主要有：支氣管肺泡灌洗，支氣管肺泡灌洗液(BALF)細(xì)胞分類計(jì)數(shù)，肺組織病理切片，比色法檢測(cè)一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS)。乩ISA法檢測(cè)BALF中IL-4，IL-5，IFN-γ及嗜酸細(xì)胞活化趨化因子(Eotaxin)。 結(jié)果：1.豚鼠模型實(shí)驗(yàn)：①病理切片：對(duì)照組氣道纖毛上皮排列整齊，氣管/血管周圍無(wú)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，無(wú)充血水腫；模型組支氣管周圍

7、可見大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，以嗜酸性粒細(xì)胞為主，氣道上皮結(jié)構(gòu)紊亂，部分有脫落；SEB組支氣管周圍炎性細(xì)胞明顯減輕，嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)減少，充血水腫狀況改善。②BALF中分類計(jì)數(shù)：模型組豚鼠BALF中白細(xì)胞總數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞及嗜酸性粒細(xì)胞占白細(xì)胞總數(shù)百分比均高于對(duì)照組(P＜0.01)，SEB組均顯著低于模型組(P＜0.01)。③BALF中細(xì)胞因子檢測(cè)：SEB組BALF中細(xì)胞因子IL-4濃度低于模型組，而IFN-γ濃度較模型組高，IFN-γ/IL-

8、4比值高于模型組。以上結(jié)果說(shuō)明，SEB在一定程度上可以緩減致敏豚鼠的哮喘發(fā)作癥狀及其氣道炎癥反應(yīng)。 2.小鼠模型實(shí)驗(yàn)：①病理切片：SEA組和SEB組氣道變應(yīng)性炎癥有明顯改善，鏡下可見支氣管、細(xì)支氣管和伴行小血管周圍炎性細(xì)胞浸潤(rùn)程度減輕，嗜酸-3-性粒細(xì)胞(Eos)浸潤(rùn)減少，充血水腫狀況改善，氣道上皮結(jié)構(gòu)趨于正常。②BALF中分類計(jì)數(shù)：SEA組和SEB組小鼠BALF細(xì)胞總數(shù)、Eos百分比與Eos絕對(duì)計(jì)數(shù)較模型組均有明顯降低。③BA

9、LF中細(xì)胞因子及Eotaxin檢測(cè)：SEA組和SEB組小鼠BALF中僅IFN-γ濃度高于模型組，細(xì)胞因子IL-4、IL-5和Eotaxin濃度均低于模型組。④NO和NOS測(cè)定：SEA組和SEB組小鼠BALF中NO和NOS濃度低于模型組。 結(jié)論：本課題首次在動(dòng)物模型上證實(shí)預(yù)先給予腹腔注射金黃色葡萄球菌腸毒素(SE)，可以抑制其OVA致敏激發(fā)所致的變態(tài)反應(yīng)性氣道炎癥，調(diào)節(jié)Th1/Th2型細(xì)胞因子分泌，減少炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生，從實(shí)驗(yàn)方面進(jìn)