金黃色葡萄球菌腸毒素A和B對哮喘氣道炎癥的作用研究.pdf

1、背景：支氣管哮喘是一種具有家族遺傳性的、伴有全身免疫功能紊亂的變態(tài)反應性疾病。近年來支氣管哮喘的發(fā)病率持續(xù)升高，并且地區(qū)間發(fā)病率存在巨大差異，這讓人們注意到生活的衛(wèi)生化可能增加支氣管哮喘的發(fā)病風險。因此有學者根據(jù)大量流行病學調查資料提出了“衛(wèi)生學說”，即感染、腸道固有菌群的刺激、內毒素暴露、傳統(tǒng)的農(nóng)業(yè)生活環(huán)境可以降低發(fā)生支氣管哮喘等變態(tài)反應性疾病的風險[1-2]。以上這些聯(lián)合作用與特異性IgE的產(chǎn)生與否無相關性，說明早期暴露于微生物的感

2、染可以部分地干擾后天哮喘變態(tài)反應的發(fā)生。例如：中耳炎或其它幼年時期的感染可能預防兒童和青少年發(fā)生變應性致敏疾病[3-4]。金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的腸毒素(staphylococcalenterotoxin，SE)是一組有高度生物學活性的蛋白質，在免疫學中現(xiàn)巳被確認是一種典型的超級抗原(superantigen，SAg)。SAg是一類來源復雜的蛋白質，其在免疫應答中只需極微量(ng水平)的這種抗原，利用一種非常獨特的機制刺激大量T細胞增殖并使

3、之產(chǎn)生細胞因子和細胞毒性[5]。目前，采用分子生物學技術對SAg進行加工處理，從而去除SAg對人體的毒害作用，而保留SAg的免疫學特性，使其廣泛應用于對腫瘤，感染性疾病及其他疾病的防治研究中，為免疫系統(tǒng)疾病的治療開辟了新的道路[6-7]。 目的：本課題通過探討SE對實驗性哮喘模型中Th1/Th2型細胞因子和其它炎癥介質的調節(jié)作用，研究SE對哮喘氣道炎癥的預防作用，為哮喘的防治提供一種新的免疫防治方法。 方法與內容：本研究

4、包括兩個部分。第一部分：SEB對豚鼠實驗性哮喘氣道炎癥及Th1/Th2型細胞因子的影-2-響。 用OVA腹腔注射致敏、霧化激發(fā)方法建立豚鼠變應性氣道炎癥模型。實驗組豚鼠在接受OVA致敏之前10天分別給與10ugSEB腹腔注射，隨后觀察其對OVA致敏激發(fā)所致豚鼠變應性氣道炎癥的預防作用以及對Th1/Th2型細胞因子的影響。動物實驗方法學及檢測指標主要有：外周血細胞分類計數(shù)，支氣管肺泡灌洗液(BALF)細胞分類計數(shù)，肺組織病理切片，

5、乩ISA法檢測血清及BALF中IFN-γ和IL-4濃度。 第二部分：早期注射SEA、SEB對支氣管哮喘小鼠氣道炎癥及其炎癥介質的調節(jié)作用。 用OVA腹腔注射致敏、霧化激發(fā)方法建立BALB-c小鼠變應性氣道炎癥模型。實驗小鼠分別在出生后一周開始每隔一天每只注射0.1mlSEA或SEB(濃度為1ug/ml)，連續(xù)注射7次，對照組和模型組注射生理鹽水0.1ml/只進行對照，隨后觀察其對OVA致敏激發(fā)所致BALB-c小鼠變應性氣

6、道炎癥的預防作用以及對Th1/Th2型細胞因子的影響。動物實驗方法學及檢測指標主要有：支氣管肺泡灌洗，支氣管肺泡灌洗液(BALF)細胞分類計數(shù)，肺組織病理切片，比色法檢測一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS)。乩ISA法檢測BALF中IL-4，IL-5，IFN-γ及嗜酸細胞活化趨化因子(Eotaxin)。 結果：1.豚鼠模型實驗：①病理切片：對照組氣道纖毛上皮排列整齊，氣管/血管周圍無炎性細胞浸潤，無充血水腫；模型組支氣管周圍

7、可見大量炎性細胞浸潤，以嗜酸性粒細胞為主，氣道上皮結構紊亂，部分有脫落；SEB組支氣管周圍炎性細胞明顯減輕，嗜酸性粒細胞浸潤減少，充血水腫狀況改善。②BALF中分類計數(shù)：模型組豚鼠BALF中白細胞總數(shù)、嗜酸性粒細胞及嗜酸性粒細胞占白細胞總數(shù)百分比均高于對照組(P＜0.01)，SEB組均顯著低于模型組(P＜0.01)。③BALF中細胞因子檢測：SEB組BALF中細胞因子IL-4濃度低于模型組，而IFN-γ濃度較模型組高，IFN-γ/IL-

8、4比值高于模型組。以上結果說明，SEB在一定程度上可以緩減致敏豚鼠的哮喘發(fā)作癥狀及其氣道炎癥反應。 2.小鼠模型實驗：①病理切片：SEA組和SEB組氣道變應性炎癥有明顯改善，鏡下可見支氣管、細支氣管和伴行小血管周圍炎性細胞浸潤程度減輕，嗜酸-3-性粒細胞(Eos)浸潤減少，充血水腫狀況改善，氣道上皮結構趨于正常。②BALF中分類計數(shù)：SEA組和SEB組小鼠BALF細胞總數(shù)、Eos百分比與Eos絕對計數(shù)較模型組均有明顯降低。③BA

9、LF中細胞因子及Eotaxin檢測：SEA組和SEB組小鼠BALF中僅IFN-γ濃度高于模型組，細胞因子IL-4、IL-5和Eotaxin濃度均低于模型組。④NO和NOS測定：SEA組和SEB組小鼠BALF中NO和NOS濃度低于模型組。 結論：本課題首次在動物模型上證實預先給予腹腔注射金黃色葡萄球菌腸毒素(SE)，可以抑制其OVA致敏激發(fā)所致的變態(tài)反應性氣道炎癥，調節(jié)Th1/Th2型細胞因子分泌，減少炎癥介質的產(chǎn)生，從實驗方面進