19-去甲睪酮殘留的酶聯(lián)免疫檢測方法和試劑盒的研究.pdf

1、19-去甲睪酮(19-nortestosterone，17 β NT)，是一種具有雄激素樣作用的同化激素，常常作為促生長劑用于動物源食品的生產(chǎn)中，以提高產(chǎn)量和飼養(yǎng)效率。許多國家和地區(qū)都已禁止利用17 β NT來促進動物的生長。本研究制備了抗17 β NT的多克隆抗體，建立了17 βNT的酶聯(lián)免疫檢測(ELISA)方法，并在此基礎(chǔ)上開發(fā)了17 β NT的ELISA試劑盒。 將19-去甲睪酮經(jīng)羧甲基羥胺肟化，然后采用混合酸酐法將肟化

2、產(chǎn)物分別與牛血清蛋白(bovine serum albumin，BSA)和卵清白蛋白(ovalbumin，OVA)偶聯(lián)，紫外分光光度法測定其交聯(lián)率分別為22和19。用17 β NT與BSA的偶聯(lián)物進行動物體免疫，獲得了17 βNT的多克隆抗體。經(jīng)間接酶聯(lián)免疫測定，其抗血清的稀釋度可以達到1：102400。 以此抗血清為基礎(chǔ)，建立了17 β NT的間接酶聯(lián)免疫方法?？疾炝朔磻?yīng)時間、離子強度、洗液的濃度以及抗體稀釋液的pH等因素對該

3、方法的影響，選擇最優(yōu)的分析條件。優(yōu)化后標準曲線的線性回歸方程為y=-0.3194x+1.6316，R<'2>=0.9927，其線性范圍為0.1～25 ng/mL；IC<,50>為3.5ng/mL。該方法對六種結(jié)構(gòu)類似的甾類化合物進行檢查，均無明顯的交叉反應(yīng)。采用1.0ng/g和5.0ng/g兩個添加濃度水平分別測定17 β NT在空白牛肌肉組織的回收率，其中1.0ng/g的回收率范圍為96.4％～104.7％，變異系數(shù)范圍為5.2～8.