桔霉素分子印跡仿生酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法研究.pdf

1、本研究采用本體聚合方法以3，5-二羥基-2-萘甲酸為假模板分子，甲基丙烯酸為功能單體，乙二醇二甲基丙烯酸酯為交聯(lián)劑，在酶標(biāo)板孔表面直接紫外引發(fā)合成了對(duì)桔霉素分子印跡聚合物膜，成功將分子印跡技術(shù)應(yīng)用于免疫分析中，建立了一種食品中桔霉素分子印跡仿生酶聯(lián)免疫吸附法。研究對(duì)分子印跡膜合成參數(shù)和條件進(jìn)行了詳細(xì)優(yōu)化，并通過(guò)掃描電鏡對(duì)分子印跡膜進(jìn)行了結(jié)構(gòu)表征。并且，通過(guò)平衡結(jié)合實(shí)驗(yàn)和吸附動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)考察了分子印跡膜的吸附性能。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:所合成的分子

2、印跡聚合物膜對(duì)桔霉素具有良好的特異性吸附能力和較快的吸附速度。印跡膜飽和吸附容量達(dá)到1.07μg well-1，明顯高于非印跡聚合物膜（0.213μg well-1）。當(dāng)桔霉素濃度為50mgL-1時(shí)，10min內(nèi)可達(dá)到最大吸附容量的54.9％;30min時(shí)可達(dá)到最大吸附容量的97.3％;吸附40min達(dá)到吸附平衡。研究以此分子印跡膜為仿生抗體，針對(duì)桔霉素建立了直接競(jìng)爭(zhēng)仿生酶聯(lián)免疫分析法。在優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)條件下，方法靈敏度（IC50）和最低檢

3、出限(IC15)分別達(dá)到109.20μg L-1和0.50μg L-1。對(duì)谷物中的五種生物毒素的交叉反應(yīng)率均不超過(guò)4.7％。此方法被成功地應(yīng)用于米飯，玉米，米醋三種樣品中的桔霉素的分析檢測(cè)，三個(gè)添加濃度下的回收率分別達(dá)到73.2％-89.9％，64.3-86.2％和82.3-92.8％。與高效液相色譜方法檢測(cè)結(jié)果相比，檢測(cè)結(jié)果具有很好的一致性，相關(guān)系數(shù)為0.9942。本研究?jī)?nèi)容為食品樣品中桔霉素檢測(cè)提供了一種穩(wěn)定、可行、低成本的檢測(cè)方法