致敏性青霉素降解物的酶聯(lián)免疫檢測方法研究.pdf

1、目前青霉素酶解產(chǎn)物沒有有效的檢測手段，但其對人體的致敏危害更嚴重，因此建立一種簡單、快速的青霉素降解物酶聯(lián)免疫分析方法具有重要的現(xiàn)實意義。本論文建立了針對青霉素酶解產(chǎn)物的酶聯(lián)免疫檢測方法，可有效地對牛奶中的青霉噻唑酸進行快速地分析。
　　 根據(jù)青霉噻唑酸及青霉素G的結構特征，設計合成青霉噻唑酸人工抗原，免疫獲得的青霉噻唑酸多克隆抗血清效價高達1:240000，100μg L-1青霉噻唑酸的抑制率為52.67％。利用Proton

2、A-Sepharose4B親和層析柱純化抗體后，通過對抗體包被量、酶標抗原用量、樣本稀釋液pH和離子強度等參數(shù)的優(yōu)化，建立了一種簡便、快速的直接競爭酶聯(lián)免疫檢測方法。此法具有較高的靈敏度，IC50為0.320±0.012μg L-1，檢測限IC15為0.031±0.002μg L-1，且穩(wěn)定性好，板內(nèi)變異0.85～7.81％，板間變異1.33～10.10％。進一步考察了樣品的基質(zhì)影響及其消除方法，牛奶和奶粉經(jīng)離心和稀釋即可消除基質(zhì)影響，

3、無需有機溶劑或液液萃取、固相萃取等凈化手段，樣品加標回收率為72.75～93.25％，可滿足快速篩選方法的要求。
　　 通過高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用，對建立的青霉噻唑酸直接競爭酶聯(lián)免疫檢測方法的準確性進行了驗證。兩種方法檢測結果具有較高的相關性，線性相關系數(shù)R2值為0.9977。
　　 研究了牛奶熱處理對青霉噻唑酸ELISA方法的影響，結果表明添加降解物的牛奶經(jīng)過不同熱處理對檢測結果沒有影響，顯示該方法具有良好的適用性。采用