紅霉素分子印跡聚合物制備及免疫檢測(cè)應(yīng)用研究.pdf

1、本文采用本體聚合法制備紅霉素分子印跡聚合物，并應(yīng)用所制備的紅霉素分子印跡聚合物作為人工抗體替代紅霉素的生物抗體，建立了一種紅霉素分子印跡化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)方法，結(jié)果如下：
　　1.紅霉素分子印跡聚合物合成
　　以紅霉素為模板分子，甲基丙烯酸為功能單體，乙二醇二甲基丙烯酸酯為交聯(lián)劑，乙腈為溶劑，偶氮二異丁腈為引發(fā)劑，恒溫?zé)峋酆现苽浼t霉素分子印跡聚合物。
　　2.紅霉素分子印跡聚合物制備條件的優(yōu)化
　　(1)模板分子、

2、功能單體、交聯(lián)劑的用量：當(dāng)模板分子、功能單體、交聯(lián)劑摩爾比為1:4:20時(shí)，紅霉素分子印跡聚合物吸附性能最佳。
　　(2)聚合溶劑的選擇(乙醇，醇，乙腈)：當(dāng)溶劑為乙腈時(shí),紅霉素分子印跡聚合物吸附性能最佳。
　　(3)引發(fā)劑用量的選擇（0.01g、0.05g、0.1g、0.2g、0.3g）：當(dāng)引發(fā)劑用量為0.1g時(shí)，吸光度值最小，模板分子與功能單體聚合效果最佳。
　　(4)聚合溫度的選擇（30℃、40℃、50℃、60℃

3、70℃）：當(dāng)在60℃恒溫水浴的環(huán)境下來(lái)進(jìn)行聚合反應(yīng)，吸光度值最小，聚合效果最好。
　　(5)聚合反應(yīng)時(shí)間的選擇：當(dāng)聚合反應(yīng)時(shí)間為24h時(shí)，聚合反應(yīng)最充分，合成的紅霉素分子印跡聚合物吸附效果最好。
　　(6)聚合物洗脫：配制不同比例的甲醇乙酸混合溶液分別于索式提取器和振蕩器中，對(duì)紅霉素分子印跡聚合物進(jìn)行洗脫處理，當(dāng)甲醇與乙酸的體積比為1:1時(shí)，在振蕩器中洗脫，其洗脫時(shí)間最短為24h。
　　3.紅霉素分子印跡聚合物性能

4、r>　　(1)紅霉素分子印跡聚合物吸附性能研究，當(dāng)紅霉素溶液濃度為170?g/mL時(shí)，紅霉素分子印跡聚合物的吸附量最大，為130.8?g/mg，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于非印跡的最大吸附量34.6?g/mg，接近其吸附量的4倍，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)制備出來(lái)的紅霉素分子印跡聚合物對(duì)紅霉素表現(xiàn)出優(yōu)越的吸附性能。
　　(2)紅霉素分子印跡聚合物吸附動(dòng)力學(xué)
　　由于吸附動(dòng)力學(xué)曲線不隨底物起始濃度的改變而改變，并且在紅霉素濃度為140?g/mL時(shí)有急劇升高的趨勢(shì)，

5、隨著吸附時(shí)間的增加，MIP的空穴捕獲越來(lái)越多的紅霉素分子，吸附量迅速增大，4h時(shí)基本達(dá)到吸附平衡，吸附效果不再受時(shí)間的影響。
　　(3)紅霉素分子印跡聚合物特異性研究:
　　紅霉素分子印跡聚合物對(duì)濃度為140?g/mL的紅霉素、羅紅霉素、氯霉素溶液吸附4h時(shí)，紅霉素印跡聚合物對(duì)紅霉素、羅紅霉素、和氯霉素的吸附量分別為90.4?g/mg、30.2?g/mg、18.6?g/mg，因此實(shí)驗(yàn)制備出的分子印跡聚合物對(duì)模板分子的吸附量遠(yuǎn)

6、遠(yuǎn)大于對(duì)其結(jié)構(gòu)類似物氯霉素和羅紅霉素的吸附量，說(shuō)明MIP對(duì)紅霉素具有特異性吸附能力。
　?。?）紅霉素分子印跡聚合物熱穩(wěn)定性:
　　隨著溫度的升高紅霉素分子印跡聚合物的吸附性能隨之下降，但整體來(lái)看下降的比較平緩，經(jīng)溫度100℃處理完后，聚合物的吸附量達(dá)到了108.4?g/mg，仍是最高吸附量的83％，所以說(shuō)明實(shí)驗(yàn)制備的紅霉分子印跡聚合物受溫度的影響極小。
　?。?）紅霉素分子印跡聚合物耐酸堿腐蝕性
　　紅霉素分子

7、印跡聚合物經(jīng)過酸堿溶液浸泡后其形態(tài)基本保持不變，并且能達(dá)到最大吸附量的92.9%-96.8%,并且在弱酸和弱堿浸泡下的吸附量要稍高于強(qiáng)酸和強(qiáng)堿浸泡下的吸附量，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)制備的MIP受化學(xué)性質(zhì)的影響極小。
　?。?）紅霉素分子印跡聚合物重復(fù)性
　　紅霉素分子印跡聚合物每次的吸附量都會(huì)比前一次有所下降，對(duì)同一印跡聚合物進(jìn)行了五次吸附解吸的實(shí)驗(yàn)，第五次吸附量為112.3?g/mg，是第一次吸附量的87.46％。由此可見，實(shí)驗(yàn)制備的分

8、子印跡聚合物重復(fù)性使用良好。
　　4．建立一種應(yīng)用所制備的紅霉素分子印跡聚合物代替生物抗體測(cè)定紅霉素的直接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免法，并與化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)法聯(lián)用來(lái)檢測(cè)水產(chǎn)品中紅霉素的殘留量。以紅霉素濃度為橫坐標(biāo)，發(fā)光值為從坐標(biāo)，建立了紅霉素藥殘化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性方程為：y=-3154.5x+27563，相關(guān)系數(shù)為0.988.最低檢出限為0.87?g/L，線性范圍0.9?g/L-8.1?g/L，其加標(biāo)回收率在87.7%-92.9%之

9、間，批內(nèi)變異系數(shù)小于8.5%,而批間變異系數(shù)則小于13.2%。
　　5．應(yīng)用所建立的紅霉素分子印跡化學(xué)發(fā)光免疫法與紅霉素Elisa分析法進(jìn)行紅霉素檢測(cè)結(jié)果的比較，結(jié)果顯示，當(dāng)測(cè)量海參均質(zhì)樣品中紅霉素添加量為1?g/kg時(shí)，紅霉素Elisa分析法的檢測(cè)結(jié)果為0.926±0.02?g/kg，紅霉素分子印跡化學(xué)發(fā)光免疫法的檢測(cè)結(jié)果為0?g/kg，當(dāng)測(cè)量海參均質(zhì)樣品中紅霉素添加量為3?g/kg時(shí)，紅霉素Elisa分析法的檢測(cè)結(jié)果為2.78