氯霉素分子印跡聚合物的合成及應用.pdf

1、分子印跡技術（molecularly imprinting technique）是對目標化合物具有特定識別能力的一種聚合物制備技術。分子印跡聚合物（molecularly imprinted polymers，MIPs）是一種具有較強分子識別能力的新型高分子仿生材料，其具有類抗體的特異性、高選擇性、高強度等優(yōu)點，另外還具有制備簡單、成本低、模板分子可回收重復利用等特點，使其在色譜分離、傳感器、模擬酶催化、膜分離及固相萃取等許多領域得到了

2、廣泛的應用。 氯霉素（Chloramphenicol，CAP）是一種殺菌力極強的廣譜抗生素，由于其優(yōu)良的抗菌性、穩(wěn)定的藥性、低廉的價格，而廣泛作為飼料添加劑，用于治療細菌性疾病。但研究發(fā)現(xiàn)CAP對骨髓和新生兒有較大的毒性，易引起人體血中毒，導致不可逆的再生障礙性貧血等嚴重的毒副作用，對人類的健康構成巨大的潛在威脅。因此，歐盟、美國均在法規(guī)中規(guī)定CAP的殘留限量標準為“零容許量”。我國農(nóng)業(yè)部規(guī)定CAP及其鹽、脂等在食品動物的所有可

3、食組織中不得檢出。CAP的檢測方法主要有微生物法、免疫分析法、氣相色譜法、色譜質(zhì)譜聯(lián)用法、超臨界流體色譜法以及免疫熒光毛細管電泳技術等等。由于樣品中的CAP殘留濃度低，基體成分復雜，且常規(guī)樣品前處理方法步驟繁瑣，嚴重限制了常規(guī)快速檢測方法和儀器分析方法對樣品中CAP殘留的有效檢測。 樣品的提取、富集和凈化是殘留物分析的關鍵步驟，固相萃?。╯olid-phase extraction，SPE）、基質(zhì)固相分散（matrixsolid

4、-phase dispersion，MSPD）等樣品預處理技術近年來得到了越來越廣泛的應用。SPE是獸藥殘留分析常用的樣品處理與富集方法之一。常規(guī)的基于反相或離子交換作用的固相萃取材料在獸藥殘留檢測應用中往往選擇性較差，給后面的儀器分析造成困難。利用MIP的分子識別能力，將其作為固相萃取材料，可望實現(xiàn)有選擇的固相萃取，克服生物樣品體系復雜、預處理手續(xù)繁瑣等因素，在富集待分析物的同時，除去大部分干擾組分，從而方便儀器分析，是發(fā)展痕量分析方

5、法的重要途徑。MSPD是一種新的樣品處理技術，其基本操作是將樣品（固態(tài)或液態(tài)）直接與固相萃取材料一起混合研磨，使樣品均勻分散于固定相顆粒的表面，形成獨特的色譜固定相裝柱，然后依靠所選定的溶劑洗脫樣品。它濃縮了傳統(tǒng)樣品的均化、組織細胞裂解、提取、過濾、凈化等過程，使樣品的預處理變得簡單快捷，不僅測試樣品和溶劑用量減少，而且也避免了目標物的損失。 本研究以氯霉素（CAP）為模板分子，甲基丙烯酸二乙氨基乙酯（DEAEM）為功能單體，乙

6、二醇二甲基丙烯酸酯（EDMA）為交聯(lián)劑，偶氮二乙丁腈（AIBN）為引發(fā)劑，四氫呋喃為溶劑，采用本體聚合的方法制備氯霉素分子印跡聚合物（CAP-MIP），通過吸附動力學曲線等優(yōu)化了聚合物的合成條件，由此制備的MIP對CAP有很好的吸附能力，通過將MIP對CAP、甲砜霉素（thiamphenicol，TAP）和氟甲砜霉素（florfenicol，F(xiàn)F）的吸附性進行比較研究，顯示由此方法制備的CAP-MIP對CAP有較好的特異性吸附能力。

7、 將上述方法制備的CAP-MIP作為填料建立了CAP的分子印跡固相萃取方法，結果表明：CAP-MIP對CAP的吸附率高于94.7％，CAP-MIP的最大吸附量達4670μg/g。同時，本研究首次將CAP-MIP作為基體固相擴散吸附劑（MIP-MSPD）分離富集牛奶中的氯霉素殘留，使用MIP-MSPD和HLB固相萃取柱共同處理樣品以及僅用MJP-MSPD兩種方法處理樣品。最終用HPLC進行檢測。在優(yōu)化條件下，不使用固相萃取柱凈化的方法

8、的檢出限為0.15ng/mL，定量限為0.5ng/mL。不同氯霉素添加量的平均回收率高于89.7％，相對標準偏差小于10.1％。該方法操作簡單快速，準確度好，精密度高且無需大量有機溶劑。 在本體聚合方法合成CAP-MIP的基礎上，利用沉淀聚合法合成了CAP分子印跡聚合物微球（（molecularly imprinted polymeric microspheres，MIPM）。由于本體聚合法得到的大塊聚合物需要研磨粉碎，費時費力