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文檔簡(jiǎn)介
1、本論文對(duì)煙堿類(lèi)農(nóng)藥烯啶蟲(chóng)胺殘留的間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法(icELISA)進(jìn)行了系統(tǒng)的研究。
本實(shí)驗(yàn)以烯啶蟲(chóng)胺為原料,用3-巰基丙酸Cl原子取代,從而引入羧基活性基團(tuán),成功制備了半抗原。采用活化酯法將半抗原分別與牛血清蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)偶聯(lián)制備免疫原和包被原,免疫原免疫大耳白兔以后,成功獲得了特異性抗烯啶蟲(chóng)胺的多克隆抗體。
通過(guò)優(yōu)化方法工作條件,建立了一種簡(jiǎn)便、快捷、靈敏的煙堿類(lèi)農(nóng)藥烯啶蟲(chóng)胺的間接競(jìng)
2、爭(zhēng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法(icELISA)。間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法中包被原的包被濃度為0.05μg/well,抗體的稀釋度為1∶2000,緩沖液為濃度為0.05molL-1的PBS,封閉液為0.5%脫脂乳粉/PBS。此方法的靈敏度(IC50值)為2.18±0.22ngmL-1,檢測(cè)限(LOD,以IC15計(jì)算)為0.20±0.02ngmL-1。烯啶蟲(chóng)胺抗體具有良好的特異性,與煙堿類(lèi)農(nóng)藥吡蟲(chóng)啉、啶蟲(chóng)脒、噻蟲(chóng)啉的交叉反應(yīng)率分別是1.49%、0.2
3、7%和0.28%,而與其他種類(lèi)的農(nóng)藥的交叉反應(yīng)率均低于0.01%。選取4種水樣(純凈水、自來(lái)水、井水、河水),4種果汁(番茄汁,蘋(píng)果汁,橙汁,葡萄汁),3種蔬菜(番茄,黃瓜,卷心菜)作為樣品,進(jìn)行了烯啶蟲(chóng)胺的添加回收實(shí)驗(yàn),烯啶蟲(chóng)胺的回收率在62.8%~116.5%之間,板內(nèi)變異系數(shù)為0.9%~9.9%,板間變異系數(shù)為1.7%~9.9%。ELISA的檢測(cè)結(jié)果與氣相色譜分析法(GC)的檢測(cè)結(jié)果有很好的相關(guān)性,兩種檢測(cè)方法檢測(cè)結(jié)果的線性回歸方
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