COX-2在胃癌發(fā)生中的相關(guān)作用及機制.pdf

1、第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文COX2在胃癌發(fā)生中的相關(guān)作用及機制姓名：吳漢平申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)（消化系病）指導(dǎo)教師：吳開春樊代明2001.4.1蘭竺竺苧查竺!查竺竺竺查?！籆OX2在胃癌發(fā)生中的相關(guān)作用及機制碩士研究生吳漢平導(dǎo)師吳開春教授樊代明教授摘要本研究旨在克隆COX一2編碼基因的全長cDNA序列，并構(gòu)建其正、反義真核表達栽休通過基因轉(zhuǎn)染

2、，逆轉(zhuǎn)原先COX一2高表達或低表達的人胃癌細胞系的表遮水平，觀察其生物學(xué)行為及相應(yīng)信號分子、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的變化情況，以初步探討COX一2表達在胃癌發(fā)生申的采些具體機制f主要實驗方法及結(jié)果包括：1由COX一2高表達的胃癌細胞中提取RNA，通過RT—PCR方法，擴增了編碼COX一2全長的cDNA序列經(jīng)序列測定加以證實2通過定向克隆方法，將目的基因按正反兩個方向亞克隆至真核表達栽體pcDNA31()，構(gòu)建其正、反義真棱表達載體pcDNA3I／

3、hCOX2()及pcDNA3I／hCOX2(1，其方向性由酶切鑒定證實3使用脂質(zhì)體介導(dǎo)的方法用反義重組栽體及空載體分別轉(zhuǎn)染COX一2異常高表達的人胃癌細胞系SGC7901，經(jīng)G418篩選，得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞株7901一AS及7901P經(jīng)免疫細胞化學(xué)及KNA斑點雜交試驗證實：在反義核酸轉(zhuǎn)染的7901一AS細胞申COX一2的蛋白及mRNA水平均下調(diào)4MTT比色試驗顯示7901一AS細胞的增殖速度低于親本SGC7901細胞5裸鼠體內(nèi)成瘤試驗表