氫醌細胞毒性、DNA損傷及沙苑子黃酮和Vc修復作用的研究.pdf

1、目的：氫醌(Hydroquinone，HQ)，又名對苯二酚(C6H6O2)，為晶狀固體，廣泛用于化工和醫(yī)療行業(yè)，氫醌還是苯的主要活性代謝產物之一。氫醌在許多實驗系統(tǒng)中均可引起遺傳損傷。在長期試驗中氫醌還是一種致癌劑。它還可增加其它化合物的致癌效應，如甲基-N-戊基亞硝胺和N-甲基-N-硝基-N-硝基胍。近年來對其遺傳毒性機制的研究取得一些進展，但確切機制還未闡明。本研究旨在了解HQ的細胞毒性、凋亡和DNA損傷及修復，試圖探討HQ可能的遺

2、傳損傷機制和防護劑，為提出有效保護苯和HQ職業(yè)暴露人群健康的措施提供依據(jù)。 方法：本研究通過MTT比色法檢測不同濃度的HQ對V79細胞作用后細胞存活率的變化，了解濃度-毒性效應之間的關系；用單細胞凝膠電泳技術檢測不同濃度HQ對V79細胞(中國倉鼠肺成纖維細胞)的DNA損傷程度及類型，并觀察不同時間段細胞的自身修復情況；采用吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)雙標記法觀察V79細胞HQ在作用下的凋亡率及其凋亡形態(tài)的改變；用DCFH-DA

3、法檢測不同濃度HQ處理V79細胞0.5h和1h后活性氧(ROS)的含量；分別用不同濃度沙苑子黃酮、維生素C與HQ共同作用于V79細胞后，用單細胞凝膠電泳技術(SCGE)檢測DNA損傷的變化情況，觀察沙苑子黃酮和維生素C對HQ所致DNA損傷的修復作用。 結果：HQ從0.15mmol/L(作用2小時)開始即對V79細胞生長產生明顯抑制作用，并隨濃度增加呈劑量反應關系。單細胞凝膠電泳結果顯示，在設置的5個濃度范圍內(0.015mmol

4、/L-1.215mmol/L)，彗星細胞拖尾率隨著濃度的增加而增加，且有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；在0.405 mmol/L濃度組，尾長、Olive尾矩、彗星矩和尾／頭長4個彗星損傷形態(tài)學指標隨著修復時間的延長而逐漸降低，其差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。AO/EB雙標記法顯示，氫醌(0.015mmol/L-1.215mmol/L，作用24小時)對V79細胞有明顯促凋亡作用，并呈濃度反應關系。DCFH-DA法檢測結果顯示，在設置的4

5、個濃度范圍內(0.015mmol/L-0.405mmol/L)，活性氧含量隨著濃度的增加而增加(P<0.01)；染毒0.5h組各濃度ROS含量均高于染毒1h組各相應濃度(P<0.01)，且呈濃度依賴關系。單細胞凝膠電泳結果顯示，200、20μmol/L維生素C和100mg/L沙苑子黃酮對0.405和0.135mmol/L濃度的HQ均有保護作用，表現(xiàn)為彗星細胞拖尾率、尾長、Olive尾矩降低，與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

6、而2000 μmol/L維生素C則加重了HQ的DNA損傷。 結論：本研究結果認為，在體外培養(yǎng)條件下，低濃度(0.15mmol/L)HQ能明顯抑制V79細胞的增殖并呈濃度依賴關系，0.015mmol/LHQ就能引起DNA損傷，主要是單鏈斷裂，這種損傷部分可自身修復。在體外培養(yǎng)條件下，低濃度(0.015mmol/L)HQ能致V79細胞凋亡，活性氧產生的高峰在0.5h，表明HQ可引起細胞DNA的氧化損傷并誘導凋亡。中低濃度維生素C(2