硫酸銦細(xì)胞毒性機(jī)制及茶多酚拮抗作用的研究.pdf

1、目的:銦(indium，In)是一種稀有金屬元素，屬于第ⅢA族。其低熔點(diǎn)、高沸點(diǎn)、傳導(dǎo)性好，具有廣泛的使用空間。它的主要用途是:生產(chǎn)銦錫氧化物(ITO)靶材(占整個(gè)銦用量的60％～70％)。經(jīng)各種途徑吸收入血的銦可與血漿蛋白(轉(zhuǎn)鐵蛋白、α-球蛋白和白蛋白)結(jié)合，迅速轉(zhuǎn)運(yùn)到軟組織和骨骼。膠狀體的銦則不與血漿蛋白結(jié)合，但可被白細(xì)胞吞噬后送到肝和脾的網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)。進(jìn)入體內(nèi)的銦主要蓄積在骨骼;皮下注射后，大部分的銦蓄積在皮膚和肌肉內(nèi);腹腔注射時(shí)

2、，銦多蓄積在腸系膜和肝臟，然后轉(zhuǎn)移到脾、腎和骨骼等。金屬銦基本無毒或低毒，而其化合物對(duì)人體具有毒性作用。其中，又以可溶性銦鹽毒性最大。本實(shí)驗(yàn)所用硫酸銦(indiumsulfate)為具有代表性的銦可溶性化合物。
　　 本研究旨在探討體外實(shí)驗(yàn)條件下硫酸銦的毒性，從氧化應(yīng)激(oxidativestress)的角度研究硫酸銦引起的L929細(xì)胞損傷及毒性機(jī)制，并進(jìn)一步探討茶多酚對(duì)該損傷的拮抗作用，以了解還原性物質(zhì)是否具有硫酸銦毒性拮抗作

3、用，為今后銦環(huán)境暴露的預(yù)防提供相關(guān)資料。
　　 方法:本研究分為三個(gè)部分。第一部分:以L929細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，首先采用四甲基偶氮唑鹽法(MTT比色法)探討不同濃度的硫酸銦對(duì)L929細(xì)胞存活率的影響，了解濃度-時(shí)間-毒性效應(yīng)之間的關(guān)系，并為后期深入研究篩選硫酸銦染毒劑量;繼而采用碘化丙啶(PI)染色，觀察細(xì)胞周期分布狀況，了解硫酸銦對(duì)L929細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)的影響，進(jìn)一步確定硫酸銦對(duì)L929細(xì)胞的細(xì)胞毒性。第二部分:在第一部分確定的

4、硫酸銦染毒濃度劑量范圍內(nèi)，用AnnexinV-FITC/PI凋亡試劑盒，檢測(cè)硫酸銦對(duì)細(xì)胞凋亡的影響，探討硫酸銦導(dǎo)致細(xì)胞損傷的可能機(jī)制。觀察硫酸銦是否導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)總蛋白含量、超氧化物歧化酶(T-SOD)活力、丙二醛(MDA)含量變化。第三部分:針對(duì)硫酸銦導(dǎo)致細(xì)胞損傷的可能機(jī)制，探討茶多酚的拮抗作用。探討茶多酚存在條件下，硫酸銦對(duì)L929細(xì)胞存活率、細(xì)胞凋亡率、細(xì)胞內(nèi)T-SOD活力和細(xì)胞內(nèi)MDA含量水平的相應(yīng)變化。
　　 結(jié)果:硫酸銦

5、從3.0mmol/L(作用24h)、6.0mmol/L(作用2h)開始即對(duì)L929細(xì)胞生長(zhǎng)產(chǎn)生明顯抑制作用，細(xì)胞存活率呈濃度-時(shí)間依賴性降低;在硫酸銦作用下，細(xì)胞周期分布變化明顯，G1期細(xì)胞減少，G2/M期和S期細(xì)胞明顯增多。在硫酸銦的作用下，細(xì)胞凋亡結(jié)果顯示硫酸銦對(duì)L929細(xì)胞具有促進(jìn)凋亡的作用;細(xì)胞內(nèi)T-SOD活力減弱，MDA含量增多，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。在茶多酚存在的條件下，0.2mg/ml的茶多酚在一定程度上對(duì)硫

6、酸銦引起的L929細(xì)胞損傷具有一定的保護(hù)作用;1.0mg/ml的茶多酚能夠明顯的降低硫酸銦導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡率升高的作用;1.0mg/ml的茶多酚對(duì)硫酸銦所致L929細(xì)胞內(nèi)T-SOD活力減弱，0.2mg/ml的茶多酚對(duì)細(xì)胞內(nèi).MDA含量增加均具有一定的拮抗作用，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:本研究結(jié)果顯示:硫酸銦低濃度、短時(shí)間即可明顯抑制L929細(xì)胞增值;并且可以導(dǎo)致細(xì)胞周期分布的改變。硫酸銦可引起細(xì)胞凋亡率的升