納米聚苯胺對巨噬細(xì)胞毒性及相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、21世紀(jì)以來,納米材料在不斷得到新的應(yīng)用的同時,其安全性也引起了人們的關(guān)注。本文旨在研究納米聚苯胺材料對大鼠原代腹腔巨噬細(xì)胞的毒性作用及其相關(guān)機(jī)理。
　　本文以快速表面聚合法制備納米聚苯胺材料,以大鼠原代巨噬細(xì)胞為對象,染毒24h、48h、72h后通過四甲基偶氮唑鹽(MTT)觀察納米聚苯胺材料的細(xì)胞毒性,并根據(jù)染毒后細(xì)胞的過氧化水平(ROS)和線粒體膜電位變化情況分析納米聚苯胺的細(xì)胞損傷作用,Hoechst染色觀察巨噬細(xì)胞凋亡狀況

2、,利用WesternBlot檢測細(xì)胞凋亡相關(guān)的caspase-8、caspase-9和caspase-3蛋白,并采用RT-PCR檢測凋亡相關(guān)的caspase-3、Bax和Bcl-2的mRNA表達(dá)水平。
　　結(jié)果顯示0.1μg/ml和1μg/ml納米聚苯胺刺激后對巨噬細(xì)胞存活率無明顯影響,而10和100μg/ml的納米聚苯胺顆粒均引起巨噬細(xì)胞的凋亡(p<0.05,p<0.01),并引起巨噬細(xì)胞活性氧水平升高和線粒體膜電位丟失。受到納

3、米聚苯胺刺激后,巨噬細(xì)胞caspase-8、9蛋白表達(dá)量無明顯變化,caspase-3蛋白表達(dá)略有升高同時被激活,并且caspase-3核酸轉(zhuǎn)錄水平顯著升高,Bcl-2/Bax比值較空白對照組有明顯降低。
　　由此推測納米聚苯胺誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡機(jī)理可能為:納米聚苯胺與巨噬細(xì)胞互相接觸后,被巨噬細(xì)胞吞噬,誘使細(xì)胞Bcl-2水平下降,Bax水平上升,線粒體膜通透性增加,線粒體膜電位大幅下降或丟失,巨噬細(xì)胞活性氧水平小幅度升高,活性氧以